一、神经干细胞研究的新进展（论文文献综述）
陈春茂[1]（2019）在《仿生静电纺水凝胶纤维束支架用于脊髓损伤修复的研究》文中提出第一部分 GelMA水凝胶生物支架的制作及其材料结构和性能表征[目的]构建定向Gelatin和GelMA水凝胶生物支架,并评估相关物理和化学性能。[方法]首先制备GelMA材料,再使用静电纺丝和紫外光照交联,制备出定向GelMA水凝胶纤维,通过纤维的多次折叠即可得到纤维束。使用静电纺丝技术制备出定向Gelatin和GelMA纤维,再通过戊二醛的交联作用,得到定向Gelatin水凝胶纤维,通过光交联获得GelMA水凝胶纤维,再通过纤维的多次折叠得到相应的纤维束支架。采用SEM对材料进行拍照,所得的图像结合NanoMesurer软件分析两组纤维的直径分布情况,采用吸水称重的方式评估支架的吸水率,将纤维支架放置在PBS中,通过称重,考察纤维支架的降解率。通过生物力学仪器测试其力学性能。[结果]经过SEM图片和NanoMesurer分析,本实验通过平行接收装置制备出表面光滑,具有相同方向的纤维支架,而滚筒接收制备的纤维支架是定向性较差。其中GelMA纤维支架的直径为1.1±0.13um,Gelatin纤维支架的直径为1.4±0.13um;通过力学测试,可以得到两种纤维支架都具有一定的弹性。其中GelMA纤维支架的最大拉伸长度是原长度的4.54倍,Gelatin纤维支架的最大拉伸长度近原长度的1.94倍。通过计算杨氏模量可以得到,GelMA纤维支架的杨氏模量为0.7Kpa,远远小于Gelatin纤维支架的杨氏模量（1.5Kpa）。而循环应力-应变结果结果显示,Gelatin纤维支架的应力应变曲线的斜率,随着反复拉伸有很大的变化。于此相反,GelMA纤维支架的曲线斜率基本不变。吸水率的测试结果显示,在0天时,GelMA纤维支架的吸水率是本身的6.17倍,而Gelatin纤维支架为5.26倍。虽然随着时间的延长,两种支架的吸水率都在下降,但是GelMA支架的吸水率始终大于Gelatin（p<0.05）。降解实验显示,在第 3 天时,GelMA 剩余 94.8±0.84%,Gelatin 剩余 95.2±0.84（p>0.05）,但是随着时间的延长,Gelatin支架和GelMA支架的降解率差距在增大,35天后Gelatin支架剩余 40±1.58%,而 GelMA 支架只剩下 19±1.58%（p<0.05）。[结论]GelMA纤维支架具备定向良好的定向效果和力学性能,并且实现较好的保水性和可降解性。第二部分 GelMA水凝胶生物支架促进BMSCs和神经元细胞的粘附和体外迁移的研究[目的]探讨定向Gelatin和GelMA水凝胶生物支架促进大鼠BMSCs和海马神经元细胞迁移、黏附、增殖的能力。[方法]将BMSCs种植在Gelatin和GelMA支架上,培养1天后,将种植在支架上的细胞进行酒精脱水,冻干后利用扫描电子显微镜观察细胞的粘附和迁移。将BMSCs种植在两种支架上后在第1和3天,使用CCK-8法检测细胞增殖率。通过鬼笔环肽染色检测支架促进细胞粘附的能力。使用活死细胞染色技术,检测支架的生物相容性。通过荧光染色,观察纤维支架对海马神经元细胞的形态和轴突生长的影响。采用共聚焦显微镜和鬼笔环肽染色,在培养细胞的1、2、3天后,进行拍照,考察Gelatin和GelMA支架促进细胞迁徙渗透的能力。[结果]BMSCs在Gelatin和GelMA支架上状态正常,粘附良好,且细胞朝GelMA支架深处迁移。鬼笔环肽染色显示,BMSCs在两种支架上都有很好的粘附,但对照组上细胞形状为不规则形状,朝向不定,而长在Gelatin和GelMA支架上的细胞细长,且定向。活死细胞染色结果显示,接种在Gelatin和GelMA的细胞大部分都存活。CCK-8结果显示,在培养的1、3天细胞正常增殖。GelMA支架显着促进细胞的增殖,相对于其余二组差异有显着统计学意义（p<0.01）,对海马神经元细胞的轴突染色结果显示,对照组上的海马神经元细胞没有生长,轴突没有延伸,非定向的两种纤维支架虽然可以促进轴突的延长,但是不能使轴突朝一个方向延伸。而Gelatin支架和GelMA支架上的海马神经元细胞不仅数量多,定向,而且轴突延伸性好,其中GelMA支架上的轴突延伸性最好。通过鬼笔环肽染色和共聚焦显微镜拍照,可以看出,GelMA支架上的细胞随着时间的延长,正在逐渐的往下迁移（第一天为38.9±4.92um,第二天为127.55±14.54um,第三天为197.5±18.lum）,而Gelatin支架上的细胞只有轻微迁移（第一天 24±4.35um,第二天 41.87±6.28um,第三天 60.6±8.4um）。定量数据显示GelMA组与Gelatin组相比,差异有统计学意义（p<0.05）。[结论]GelMA支架生物相容性良好,能促进细胞在支架上黏附、增殖、迁移;在体外有促进神经元轴突伸长的能力。第三部分 GelMA水凝胶生物支架促进脊髓损伤修复的研究[目的]探讨GelMA支架促进活体脊髓损伤修复的可行性。[方法]建立大鼠脊髓损伤模型,分为Gelatin和GelMA纤维支架和对照组。通过BBB运动评价量进行大鼠术后下肢运动功能的评价。在术后12周取脊髓进行组织切片及免疫组化染色(包括神经干细胞染色,神经元染色,神经轴突染色,胶质疤痕染色,星形胶质细胞染色,血管内皮细胞染色。观察神经修复、血管形成情况。[结果]通过评价下肢功能恢复情况可以判断支架修复脊髓的效果。术后第1、2、3、4、6、8、10、12周使用BBB量表进行大鼠后肢运动功能评价。结果显示,术后对照组和Gelatin组大鼠下肢自主运动功能恢复较慢且有限,GelMA组大鼠恢复较好。随着治疗时间的延长,GelMA组的治疗效果与另外两组相比,越来越好,当达到12周时GelMA组评分达到12.4±1.67,相对于空白组6.6±1.52和Gelatin组8±1.23有显着性差异（p<0.05）。本研究中脊髓神经再生观测指标包括神经干细胞、神经元以及神经突触。Nestin染色结果显示在损伤后12周仍能在损伤部位观察到神经干细胞的存在,通过光密度定量测定发现GelMA组脊髓中神经干细胞明显多于Gelatin组和空白对照组（p<0.05）,证明GelMA支架更适宜周围NSCs向支架内迁移并生存。而神经元是脊髓功能恢复的细胞基础,同样,Tuj-1标记的由NSCs分化的神经元在GelMA支架内于其Gelatin支架和对照组相比显着性增高（p<0.05）。神经突触免疫组化的定性和定量结果显示,GelMA支架组的synaptophysin阳性信号明显高于Gelatin组和空白对照组（p<0.05）,证明GelMA支架内有更多的突轴形成。星形胶质细胞和胶质疤痕的染色结果显示,Gelatin组和空白对照组有大量的胶质细胞增生和胶质疤痕形成,而GelMA组明显少（p<0.05）。通过对比12周后CD31标记的血管内皮细胞的图片,GelMA组比另外两组有着更多的荧光,定量结果显示差异有统计学意义（p<0.05）。[结论]用电纺水凝胶纤维构建的软仿生支架,不仅促进了神经干细胞的迁移,诱导其分化为神经元,而且抑制了其向胶质细胞分化,减少胶质瘢痕的形成,同时促进了血管生成。此外,该支架具有较高的弹性,可以在缺少骨性椎管保护的情况下抵抗变形。仿生的水凝胶微纤维在促进活体脊髓功能再生方面被证明是有效的。
吴秋丽[2]（2019）在《低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究》文中提出【目的】脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）是一种严重的创伤性疾病,修复手段主要有手术治疗、药物治疗、细胞移植等。神经干细胞移植能够有效促进SCI后神经功能的恢复,是当前研究的热点。iPSCs诱导的神经干细胞（induced Pluripotent Stem Cells-Neural Stem Cells,iPS-NSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,自体取材避免了伦理学争议和免疫排斥,应用于细胞移植治疗脊髓损伤具有显着的优势。然而干细胞在体内存活率低、向神经方向分化较难,因此如何更好的促进其增殖、定向分化是众多研究者关注的焦点。国内外研究表明低强度脉冲超声（Low Intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS）是一种可以促进多种细胞增殖、分化的物理刺激手段,本研究旨在明确LIPUS对iPS-NSCs细胞特性的影响以及LIPUS介导的iPS-NSCs对脊髓损伤的修复作用,为干细胞的优化和SCI的治疗提供一种新的策略。本研究通过:1)体外培养iPS-NSCs,将自主研制的LIPUS激励系统作用于iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态学、增殖、分化和神经营养因子（Neurotrophic Factors,NTFs）分泌含量的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数,并初步探索LIPUS干预后细胞增殖的调控机制;2)建立脊髓损伤的动物模型,于脊髓损伤局部移植iPS-NSCs和LIPUS-iPS-NSCs细胞,评价细胞移植后SCI大鼠损伤局部组织学形态、神经营养因子含量以及运动功能的改变,初步探讨LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的效果。【方法】本实验研究分为体外实验和体内实验两部分:体外实验:利用自主搭建LIPUS细胞激励系统,以不同的刺激参数干预iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态,采用CCK-8检测其增殖活性的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数;借助最佳的激励参数,通过TUNEL、ELISA、Western Blot以及免疫组化等方法,观察LIPUS对iPS-NSCs细胞凋亡、分化以及NTFs分泌的影响,并初步探讨细胞增殖与Notch信号通路的潜在关系。体内实验:采用Impactor model-Ⅲ打击器建立Wistar大鼠脊髓损伤动物模型,分为假手术组、单纯损伤组、iPS-NSCs移植组和LIPUS-iPS-NSCs移植组,在大鼠脊髓损伤后7天进行细胞移植。术前1天、术后1天至8周,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能恢复情况;术后8周大鼠进行灌注取材切片,采用HE染色观察损伤局部空洞的面积,免疫荧光染色观察神经再生和胶质瘢痕形成的情况,ELISA检测局部脊髓组织中营养因子的含量。数据由统计学软件SPSS20.0进行分析,结果以均数±标准差（Mean±SD）形式表示,p<0.05表示具有统计学意义。【结果】1.本实验成功搭建了LIPUS细胞激励系统,LIPUS体外刺激iPS-NSCs细胞可以提高其增殖活性,且最佳的刺激参数为1MHz、8V（69.3 mW/cm2）;2.在最佳刺激参数下,LIPUS可以提高iPS-NSCs细胞活性,而对细胞凋亡没有产生明显的影响,因此1MHz、8V（69.3 mW/cm2）的LIPUS是一种安全、无创的物理刺激因子,同时能够促进iPS-NSCs细胞向神经元方向分化,促进上清液中BDNF、NGF的表达;3.在最佳刺激参数下,LIPUS干预可以促进iPS-NSCs细胞中受体Notch1和靶基因HES1蛋白水平的表达;4.在脊髓损伤体内实验中,细胞移植后,尤其是LIPUS-iPS-NSCs移植组,脊髓组织的空洞减小,轴突增生活跃,反应性星形胶质细胞减少,脊髓组织局部BDNF、NGF表达水平提高;5.功能学评分结果显示LIPUS-iPS-NSCs移植组大鼠的后肢运动功能恢复明显优于其他损伤组,差异具有统计学意义。【结论】1.本研究中自主搭建的LIPUS激励系统可以明显提高体外培养的iPS-NSCs细胞的增殖活性,增加细胞中神经营养因子的表达,促进其向神经元方向分化,其中Notch信号通路可能是调控LIPUS促进iPS-NSCs细胞活性的潜在机制;2.移植LIPUS优化的iPS-NSCs种子细胞,可以明显的改善脊髓损伤大鼠的后肢运动功能,减少局部胶质瘢痕的形成,促进轴突的再生和NTFs表达。本研究证明LIPUS是一种安全、无创的体外激励方法,可以提高iPS-NSCs细胞在脊髓损伤修复中的作用,为优化细胞移植的种子细胞提供了新策略,为脊髓损伤修复提供新思路。
胡新远[3]（2019）在《人脐带间充质干细胞外泌体在脊髓损伤中的作用及机制》文中研究说明研究目的:脊髓是中枢神经的重要组成部分之一,脊髓损伤不仅会给患者造成严重的感觉异常,还会引起患者脊髓损伤平面以下的躯体运动功能障碍,给患者及其家庭带来了沉重的心理和经济负担。目前脊髓损伤治疗的方法局限,仅能限制病情进一步恶化。及时有效的恢复损伤脊髓的上下行电信号传导对于脊髓修复及其重要,更是脊髓损伤治疗的关键点和难点。以干细胞为主的细胞替代治疗方案已取得一定效果,而干细胞来源的外泌体（exosomes）与干细胞相比,在组织损伤修复中的优势更加明显,能有效的避免干细胞移植引起的免疫排斥反应和干细胞无序分化导致的肿瘤形成风险。本课题旨在探明人脐带间充质干细胞外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cells derived exosomes,hucMSC-Exs）对SD大鼠脊髓横断损伤模型的修复效果和分子机制,为hucMSC-Exs在中枢神经系统疾病诊断和治疗中的应用提供新思路。研究方法:原代培养人脐带间充质干细胞并收集培养上清,提取hucMSC-Exs。Western blot、Nanosight和透射电镜分别检测hucMSC-Exs表面分子标记物、分析外泌体直径以及杯口状的标志性结构。构建SD大鼠脊髓完全横断损伤模型,观察术后大鼠后肢运动状况、小动物CT（micro-CT）检测脊髓损伤部位,脊髓组织切片判定脊髓横断模型的构建是否成功。通过大鼠后肢运动功能评分（BBB scores）结果评价大鼠后肢运动功能的损伤状况和恢复水平,逆行神经元标记（Fluoscent-gold retrograde stain）观察脊髓横断部位两端的阳性神经元数量,同时结合免疫组织化学染色分析脊髓损伤部位NF-200,Gap-43,SYP和PSD95等分子表达水平和分布,细胞学、组织学和功能学相结合,综合评价hucMSC-Exs对脊髓横断损伤的修复作用。为进一步探究和阐明hucMSC-Exs修复脊髓横断损伤的可能机制,收集脊髓组织H&E染色观察脊髓组织的降解范围和脊髓组织中的空洞组织,分析hucMSC-Exs对脊髓损伤组织的保护作用以及对胶质瘢痕和空洞的抑制作用。ELISA检测血液中TNF-α和IL-1β的表达水平,分析hucMSC-Exs的炎症调控作用。脊髓切片Nestin和Pax-6染色分析损伤组和hucMSC-Exs处理组脊髓损伤部位神经干细胞的数量和分布。在体外研究中,背根神经节（DRGs）与hucMSC-Exs共孵育后染色β-Ⅲ-tubulin分析神经轴突的外展长度和密度,评价hucMSC-Exs对神经元轴突外展的作用。Transwell检测NSCs向hucMSC-Exs的趋化效果,结合Radial migration实验分析NSCs在hucMSC-Exs作用下迁移能力的改变。接下来为了探明hucMSC-Exs对NSCs增殖和分化的作用,将NSCs与hucMSC-Exs共孵育,MTS实验检测细胞活力,Western blot检测细胞增殖标志物PCNA、Bcl-2和Ki67的表达情况分析hucMSC-Exs对神经干细胞体外增殖的作用。同时检测NF-200、Gap-43、SYP、PSD-95、β-Ⅲ-tubulin和GFAP等表达情况,分析hucMSC-Exs对NSCs体外分化的作用。再结合以往外泌体质谱结果利用ERK1/2通路抑制剂结合hucMSC-Exs、MTS以及Western blot等检测方法和手段,揭示hucMSC-Exs促进NSCs增殖、神经分化的分子机制。研究结果:HucMSC-Exs表面标志物CD9和CD63表达阳性。Nanosight检测外泌体直径大小为71.50±20.08纳米,透射电镜下发现hucMSC-Exs具有特征性杯口状结构。脊髓组织在离断后两端彼此分离,大鼠双后肢运动能力完全丧失。模型构建8周后,脊髓组织H&E染色显示在脊髓横断部位脊髓组织结构紊乱,胶质瘢痕增生明显且存在大量的空洞组织。大鼠后肢运动功能学评分（BBB scores）结果提示hucMSC-Exs能够促进大鼠脊髓横断损伤后的后肢运动功能恢复和脊髓损伤修复。荧光金染色结果提示hucMSC-Exs处理组模型大鼠的脊髓中出现了贯穿损伤部位的新生的神经传导通路和神经束,这些新生的神经纤维是促进模型大鼠后肢运动恢复的组织学基础。模型大鼠术后8周脊髓组织石蜡切片染色发现hucMSC-Exs能够促进神经元再生和突触重塑。脊髓组织H&E染色提示hucMSC-Exs在脊髓组织发生损伤后对其具有一定的保护作用,限制脊髓损伤范围和抑制胶质增生。ELISA检测发现炎性因子TNF-α和IL-1β的表达水平明显下降,提示hucMSC-Exs能够抑制脊髓损伤后的炎症反应。此外,研究显示hucMSC-Exs不能促进神经干细胞向损伤部位迁移,可抑制神经纤维的外展。体外细胞实验发现hucMSC-Exs能够促进神经干细胞的增殖,并促进神经干细胞的神经方向的分化。Western blot检测外泌体中含有大量的p-ERK1/2,同时发现在神经干细胞与hucMSC-Exs作用后,神经干细胞中的ERK1/2磷酸化水平增加。MTS结果提示hucMSC-Exs对神经干细胞的增殖作用可以被ERK通路抑制剂PD98059抑制。同时p-ERK1/2被抑制,Gap-43和SYP的表达也被抑制。实验结果证明hucMSC-Exs活化ERK1/2通路促进神经干细胞增殖和分化。研究结论:人脐带间充质干细胞来源的外泌体能够促进大鼠脊髓横断损伤修复和后肢运动功能的恢复,保护横断的脊髓组织,抑制胶质瘢痕和空洞形成,促进脊髓损伤原位神经元的再生和突触完整性/重建,减轻脊髓损伤大鼠的炎症反应。由于hucMSC-Exs在体内缺乏诱导神经干细胞向损伤部位迁移的能力,同时又会抑制神经纤维的外展,提示并证明了hucMSC-Exs通过活化内源性神经干细胞ERK1/2通路促进神经干细胞的增殖和神经分化,继而在损伤处形成新的信号传导通路发挥脊髓损伤修复作用。
杜军辉,李蓉,宋杨[4]（2018）在《干细胞在眼科临床和基础研究中的相关进展》文中研究说明干细胞在一定条件下可以形成成熟型细胞[1],近年来,越来越多的眼科研究学者开始关注干细胞的研究,给一些无法治疗的眼科疾病带来了全新的希望。虽然干细胞为眼科疾病治疗提供契机,但要明确干细胞分化、增殖、免疫原性及移行过程,掌握干细胞培养标准与条件,这样才能实现治疗眼科疾病的目的。现就相关研究进展进行综述。1眼科研究中涉及的相关干细胞研究1.1胚胎干细胞早期胚胎组织是胚胎干细胞的主要来源场所。胚胎干细胞作为一个多能细胞系,通过分离
马浚宁[5]（2016）在《神经干细胞移植治疗缺血性脑卒中的实验研究》文中进行了进一步梳理第一章新生小鼠海马、嗅球及皮质神经干细胞的分离培养及鉴定背景:神经干细胞是指一组具有自我更新、自我复制以及定向分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞潜能的细胞群,主要存在于哺乳动物脑组织中的嗅球、海马齿状回、大脑皮质、室管膜上区、脊髓等中枢神经组织中。具有多向分化潜能的神经干细胞可以用于中枢神经系统疾病的治疗。目的:建立一套高效完整的神经干细胞分离培养鉴定体系,分别从新生小鼠海马、嗅球、皮层组织筛选出生物学性状均一的种子细胞,建立神经干细胞库,为后续研究奠定实验室基础。方法:分别从新生昆明小鼠分离海马、嗅球、皮层组织采用机械分离和胰酶消化法提取原代神经干细胞。采用无血清培养技术、机械吹打和酶消化法对提取的原代神经干细胞进行培养及传代纯化神经干细胞。以10%的胎牛血清诱导分化纯化的神经干细胞,细胞免疫荧光行CD133、巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白染色,鉴定神经干细胞及其分化产物。细胞冻存与复苏技术建立神经干细胞库。结果与结论:从新生小鼠海马、嗅球、皮层可提取出具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞,神经干细胞巢蛋白、CD133免疫荧光检测呈阳性;神经干细胞经胎牛血清诱导后可分化为β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。说明本实验室成功建立了新生鼠海马、嗅球、皮层神经干细胞体外分离培养鉴定体系。第二章糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化及凋亡的影响背景:缺氧作为神经系统疾病发展过程中诸多病理因素中最常见的因素之一,对于内源性神经干细胞以及移植后外源性神经干细胞的存活、迁移、分化、凋亡发挥着诸多调控作用。目的:系统观察体外培养环境下,糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化、凋亡的影响。方法:从新生鼠嗅球分离培养出神经干细胞,建立糖氧剥夺模型,将神经干细胞分为常氧组和缺氧组,免疫荧光技术检测糖氧剥夺后神经干细胞分化能力,MTT法检测糖氧剥夺24,48 h后恢复正常条件培养对神经干细胞增殖能力的影响,Hochest33258荧光染色检测糖氧剥夺24,48 h时后神经干细胞凋亡状况。结果与结论:第4代神经干细胞CD133免疫荧光鉴定结果呈阳性表达,MTT细胞增殖能力检测结果示:糖氧剥夺组增殖能力明显低于常氧组（P<0.05）,糖氧剥夺48 h组增殖能力低于糖氧剥夺24 h组（P<0.05）。GFAP、β-TubulinⅢ细胞免疫荧光染色结果示糖氧剥夺48 h时后神经干细胞分化为星型胶质细胞、神经元总数明显低于常氧组（P<0.05）。Hochest33258染色凋亡率检测结果示糖氧剥夺组细胞凋亡率明显高于常氧组（P<0.01）,糖氧剥夺48 h组神经干细胞凋亡率显着高于糖氧剥夺24 h组（P<0.01）。上述结果表明糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化、凋亡造成不利影响,影响程度取决于神经干细胞对于缺氧浓度、缺氧时间及自身对于缺氧的耐受性有关。第三章光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型背景:实验性缺血性脑卒中动物模型作为研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具,光化学栓塞法制作缺血性脑卒中动物模型操作简便,稳定性好,重复性高,研究人员可以针对性的控制梗死灶的位置以及大小,是研究缺血性脑卒中病理机制的良好选择。目的:建立光栓法缺血性脑卒中动物模型,对比分析性别差异在缺血性脑卒中后梗死体积以及行为学表现的异同。方法:实验组分为病理学检测其中模型组（n=3）、假手术组（n=3）各组于建模第7d行尼氏染色和Fluoro-Jade C染色观察梗死后病理学变化;梗死体积测试组:其中雌性组（n=8）、雄性组（n=8）各组于建模第7d行计算梗死体积大小;行为学测试组:雌性假手术组（n=10）,雌性模型组（n=10）,雄性假手术组（n=10）,雄性模型组（n=9）各组于建模后1、2、3、5、7d行疲劳转棒测试和前肢抓力测试。假手术组小鼠不注射孟加拉玫瑰红,其余步骤同模型组。结果与讨论:尼氏染色可见梗死中心神经元变性坏死,空泡样病理改变,Fluoro-Jade C染色可见变性神经元阳性表达,雌性组梗死体积显着小于雄性组,模型组行为学运动功能受损程度显着大于假手术组,其中雌性组运动功能受损程度小于雄性组。以上结果表明光栓法可以成功建立缺血性脑卒中动物模型,且相同实验室参数前提下,缺血性脑卒中对于雄性造成的神经功能损伤更为严重。第四章神经干细胞移植促进光化学栓塞动物模型的运动行为功能恢复背景:缺血性脑卒中为各种原因所致的脑部血液供应障碍,导致局部脑组织缺血缺氧性坏死,而出现相应神经功能缺损的一类临床综合征。是危害中老年人身体健康和生命的主要疾病之一。在过去几十年中,其发病率和死亡率持续性增加,尤其在发展中国家给患者和家属带来了严重的精神和经济负担。从新生小鼠海马分离出的具有向神经元以及胶质细胞分化能力的神经干细胞,为缺血性脑卒中的治疗方式带来的新的曙光。目的:观察神经干细胞移植治疗光化学栓塞脑卒中模型的效果。方法:实验组分为病理学检测组其中移植组（n=6）、假手术组（n=6）各组于移植后7d行尼氏染色和Fluoro-Jade C染色观察梗死后病理学变化;梗死体积测试组:其中神经干细胞移植组（n=6）、假手术组（n=6）各组于移植后第7d行计算梗死体积大小;行为学测试组:雄性神经干细胞移植组（n=10）,雄性假手术组（n=10）,雄性模型组（n=10）各组于建模后1、2、3、5、7、14、21、28d行疲劳转棒测试和前肢抓力测试。假手术组小鼠不注射孟加拉玫瑰红,其余步骤同模型组。结果与讨论:尼氏染色结果显示较假手术组,移植组梗死体积显着降低16.32%。（假手术组:27.93±2.8mm3,n=6,神经干细胞移植组:23.37±2.25mm3,n=6,p<0.05）。此外,行为学测试中,神经干细胞移植组运动功能表现显着高于假手术组及对照组。说明神经干细胞移植是一种治疗缺血性脑卒中的有效治疗手段。
王鹏[6]（2014）在《立体定向神经干细胞移植术在颅脑损伤治疗中的疗效分析》文中研究表明目的：颅脑创伤（Craniocerebral Injury，CI）发病率高，并且后遗症多，但是截至目前尚无有效治疗方法，本课题通过观察人胚胎神经干细胞（NeuralStem Cells，NSCs）移植治疗颅脑损伤后遗症的近期疗效，初步探讨立体定向神经干细胞移植术在颅脑损伤治疗中的应用价值。方法：选取我科2010年12月至2013年10月收治的33例无框架立体定向神经干细胞移植术治疗脑外伤后遗症的病人为研究对象。严格筛查符合移植手术条件的患者，行术前各项实验室检查以及心电图、胸片、头颅CT或MRI检查以2mm扫描并刻盘。术前各项准备工作完毕之后，患者送入手术室，在局麻或者全麻下，采用无框架立体定向技术，把人胚胎神经干细胞移植入患者脑内病变部位，观察手术前后白细胞数量，肝功能、肾功能、电解质的变化情况，术后出现的不良反应。术后6个月对患者格拉斯哥昏迷评分（Glasgow Coma Score，GCS）、肌张力、肌力及功能独立性测评（Functional Independence Measure，FIM）的变化情况进行评价。搜集整理统计相关数据资料，采用SPSS17.0统计软件包对上述移植手术前后数据进行分析。结果：33例立体定向神经干细胞移植手术的成功率为100%，术后24h复查头颅CT未见颅内出血等异常征象。术前格拉斯哥昏迷评分均值为（7.23±1.11）分，术后6个月格拉斯哥昏迷评分均值为（9.34±1.32）分，术后格拉斯哥昏迷评分明显提高（P<0.05）。术后23例男性患者中有18例症状有所缓解，缓解率为78.3%，10例女性患者中有7例症状有所缓解，缓解率为70.0%，低于男性，但差别无统计学意义（P>0.05），并且3～10岁的患者缓解率高于其他年龄段，差别具有统计学意义（P＜0.05）。颅脑外伤后遗症患者手术前、手术后6个月FIM评分情况（P＜0.05）。通过分析这33例患者移植前后白细胞、肝功能、肾功能及电解质的变化可知：移植后白细胞数平均水平为[（9.3±2.7）×109]/L，明显高于移植前水平[（6.6±1.1）×109]/L，差异具有统计学意义（P﹤0.05），而肝功能、肾功能及电解质移植前后无明显变化（P﹥0.05）。移植术后6个月，29例高肌张力患者中有18例肌张力下降，其中肌张力基本正常3例，部分下降有15例，肌张力下降率为62.1%。术后肌力提高的患者有20例，患者术前肌力平均分为（2.14±1.01）分，术后肌力平均分为（3.53±1.12）分，术后肌力评分高于术前，两者差异有统计学意义（P<0.05）。术后部分患者出现发热、流涕、头痛、头胀、恶心等不适症状，但是症状都较轻微，给予对症处理后在25天内消除。结论：1、神经干细胞移植术治疗颅脑创伤后遗症近期疗效确切，并且安全可靠，不良反应轻微，未见明显排斥反应发生。2、神经干细胞移植术可以一定程度的修复神经，改善患者神经功能的缺失，能够促进脑外伤患者临床症状的改善，提高生活质量，促使患者早日回归社会。3、神经干细胞移植术将成为像内镜神经外科、显微神经外科、放射神经外科及介入神经外科一样，成为神经外科发展的主要技术和方向。4、神经干细胞移植术临床应用仍有不少问题需要解决，但极具吸引力，已经显示出光明的、诱人的前景。5、神经干细胞移植术早期可见临床效果改善，但远期效果仍需要进一步观察。
郭立云[7]（2013）在《猕猴胚胎源性神经干细胞诱导、脑内移植及其在青光眼玻璃体内的转归—探索性研究》文中认为第一部分猕猴胚胎源性神经干细胞的诱导分化、干性维持及脑内移植目的：建立稳定高效的猕猴神经干细胞体外培养、诱导体系,使其可成功的分化及特性维持；观察研究猕猴神经干细胞同种脑内移植后的转归,进一步验证猕猴神经干细胞经体外培养、诱导后的特性及可应用性,为神经干细胞临床应用研究。方法：1)以绿色荧光蛋白（Green fluorescence protein, GFP）为标记,探讨猕猴胚胎干细胞向玫瑰花环（Rosettes）结构神经干细胞的分化及其碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）和表皮生长因子（Epidermal growth factor, EGF）的扩增培养；2)经立体定位,利用微量注射器,将5ul（1X105个/u1）神经干细胞移植到猕猴海马区,移植后2个月后,取脑组织冰冻切片,用免疫组织化学和激光共聚焦鉴定移植的神经干细胞在体内的存活与分化情况。结果：1)建立了稳定高效的猕猴神经干细胞分化体系；2)分化得到的Rosettes结构神经干细胞经bFGF/EGF扩增后,能够较好的维持其Rosettes结构；3)神经干细胞移植到两只猕猴脑内后两个月,发现移植细胞能够较好的存活,并向神经元及神经胶质细胞分化。结论：经bFGF/EGF扩增培养猕猴胚胎干细胞能较好的维持神经干细胞的Rosettes结构（真正意义上的早期全能神经前体细胞）；扩增培养的神经干细胞移植到两只猕猴脑内后能维持其特性,为将来神经干细胞应用于临床提供基础理论依据。第二部分神经干细胞移植对脑外伤大鼠神经功能恢复、细胞凋亡及凋亡基因表达的影响目的：观察神经干细胞（NSCs）移植对脑损伤大鼠神经功能及细胞凋亡的影响,探讨其分子机制。方法：24只SD大鼠随机分为3组：假手术组、手术组和NSCs移植组。采用自由落体致大鼠皮质运动区脑损伤模型,NSCs于术后当天移植入脑损伤大鼠挫伤位周围4个点；术后观察大鼠的神经功能恢复情况,移植的NSCs在脑组织存活、迁移及细胞凋亡、抗凋亡基因表达情况。结果：NSCs移植后NSS评分至第7天明显比对照组下降,说明NSC移植对脑外伤大鼠神经功能有改善作用。移植NSCs能在宿主脑组织存活,并向四周迁移；凋亡细胞数量明显减少；而抗凋亡基因BCL-XL表达明显增加,与未移植NSCs的单纯手术组比较差异均有统计学意义。结论：NSCs能改善脑损伤大鼠神经功能,其机制可能与NSCs在体内存活、能够减少细胞凋亡和增加抗凋亡基因BCL-XL表达有关。第三部分适用神经干细胞移植研究的青光眼视神经损伤模型的建立目的：探索一种能够适用于干细胞移植研究的青光眼造模方法,为神经干细胞临床应用研究奠定模型基础。方法：本实验采用对新西兰白兔球结膜下注射地塞米松注射液的方式给药,2.5mg/次,一周3次（间隔一天给药）,持续8周。结果：眼底照相观察到造模眼眼球屈光间质保持清晰,视乳头凹陷明显扩大、血管呈屈膝状；病理切片显示造模眼视神经受到明显损伤；海德堡视网膜断层扫描仪（Heidelberg Retina Tomography, HRT）定量分析显示造模眼呈现盘沿面积减小1.10±0.88mm2、杯/盘比增大0.17±0.13,以及视网膜神经纤维层平均厚度降低0.44±0.31mm的青光眼性质病理改变,均达到极显着水平（p<0.001）。结论：1)本实验建立了一种简单可靠、重复性强的慢性青光眼视神经损伤的造模方法；2)造模眼眼压波动轻微,不会影响移植细胞的生长,眼底照相观察到造模眼眼球屈光间质保持清晰,适合观察神经干细胞移植后情况,此造模方法适用于干细胞移植研究。第四部分兔青光眼视神经损伤后移植神经干细胞的探索研究目的：探索青光眼视神经损伤后移植神经干细胞具体可行性。方法：青光眼视神经损伤模型建立后,以不同的移植方法双眼（模型眼及对照眼）注入猕猴神经干细胞,植入5个月后,摘取眼球,采用不同标本制作方法,固定、切片,通过共聚焦显微镜观察神经干细胞生长存活情况,并观察其在眼内迁移及与视网膜整合情况,移植后眼内反应等。结果：青光眼视神经损伤兔眼（模型眼）玻璃体内可见存活的神经干细胞,未见神经干细胞迁移及与视网膜整合,对照眼未见神经干细胞存活；此结果与移植方法、标本制作方法及免疫反应有关。结论：猕猴神经干细胞能够在青光眼视神经损伤的兔眼玻璃体内长时间存活并生长,为后续研究奠定了基础,进一步证实了本实验第三部分的造模方法适合用于神经干细胞移植的研究；神经干细胞玻璃体移植后未见向视网膜迁移整合,提示对神经干细胞眼内注入方法需进一步改良研究；仅在模型眼（注射地塞米松）观察到神经干细胞玻璃体存活生长,对照眼未见,且有眼内反应现象,为下一步研究神经干细胞眼内移植后如何控制免疫排斥反应提供了思路。第五部分单侧青光眼视神经损伤后眼外肌及其本体感受器病理学改变目的研究单侧青光眼视神经损伤后间歇性斜视（知觉性）患者眼外肌及其本体感受器的超微结构,以期了解青光眼视神经损伤患者眼运动系统的病理变化及探讨其发病机制,推进对青光眼神经疾病的认识,并为后续研究神经干细胞移植提供组织形态学基础。方法选取10例单侧青光眼视神经损伤后间歇性（知觉性）外斜视患者非注视眼内直肌附着点后长约4-5mm,宽约1Omm的眼外肌作为实验组（光镜10例、透射电镜10例）,选取10例同期角膜移植供体的健康人眼内直肌作为正常对照组（光镜5例、透射电镜5例）,制作病理标本,光镜及透射电镜下观察比较2组肌纤维及眼外肌本体感受器的超微结构差异。结果同正常对照组比较,单侧青光眼视神经损伤后间歇性（知觉性）外斜视患者眼外肌纤维排列紊乱,部分纤维萎缩、水肿,线粒体变性,眼外肌本体感受器结构出现明显异常,内外膜不完整,梭内肌纤维排列紊乱,有髓神经轴浆内有残体形成,线粒体缺如,内膜与Schwann细胞间可见粗大致密的胶原纤维增生,神经纤维内微丝、微管等细胞器减少,严重者可见有髓神经脱髓鞘。结论单侧青光眼视神经损伤后眼外肌内直肌及其本体感受器发生了病理性改变,即眼运动神经通路的效应器出现了异常改变。
于士柱,王虔[8]（2012）在《胶质瘤干细胞研究的新进展及展望》文中指出胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,多数呈浸润性生长,手术不易全切,对放化疗不敏感,故复发率高,预后普遍较差。基因干预技术、分子靶向治疗、免疫治疗等新技术有可能成为未来治疗胶质瘤的有效手段,而阐明胶质瘤发病机制,是确定关键治疗靶点及发现诊断、鉴别诊断和确定预后评估分子标志物必须解决的关键问题。胶质瘤干细胞（glioma stem cells）的发现及研究新进展为揭示胶质
刘楠,周柏玉[9]（2011）在《神经干细胞的治疗应用研究进展》文中提出哺乳动物的中枢神经系统再生仅限于胚胎时期和出生早期,即成年动物脑和脊髓内的神经细胞只会呈逐渐减少趋势,而不会更新或替代[1,2]。因此,神经干细胞的研究已经成为一大
任秀君[10]（2007）在《针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响》文中研究说明研究目的:高脂血症（hyperlipidemia,HLP）由血中脂蛋白合成与清除紊乱所致,表现为血浆脂蛋白异常、血脂增高等,属于祖国医学的“痰浊”“瘀血”范畴。它是动脉粥样硬化等心脑血管疾病发生的重要危险因素,有效地防治HLP是防治心脑血管疾病的重要途径。脑血管疾病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一。在我国死于脑血管病者居三大死因首位。其中缺血性脑血管疾病占60%～80%。脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。为了减少和延缓中风的发生,减轻中风后机体状态,从高血脂阶段早期进行针刺干预,是针刺防治中风的新视角,具有重要流行病学研究意义。高血脂与中风,神经干细胞与神经营养因子之间的关系是目前研究尚未进行探讨的部分,本研究试图通过建立高血脂合并脑缺血动物模型,并观察针刺的影响,探讨在高血脂阶段积极早期进行针刺干预,是否可通过升高神经营养因子的合成与分泌,从而促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,促进脑损伤的修复和再生。研究方法:应用大鼠喂养经典高脂饲料,化学诱导大脑中动脉血栓闭塞制造高血脂合并脑缺血模型。将动物随机分为八组:正常对照组、高血脂模型组、高血脂治疗组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组。高血脂治疗组用电针三阴交、丰隆穴治疗10天。脑缺血治疗组用针刺人中、百会穴治疗7天。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组,先给大鼠喂养高脂饲料造成高血脂模型,治疗Ⅰ组电针三阴交、丰隆穴10天后,两组同时电针三阴交、丰隆穴,针刺人中、百会穴,7天后处死。正常对照组和模型组均不针刺。用生化方法检测各组治疗前后血脂四项。应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况。实验结束用免疫组化方法检测海马区和额叶皮层脑缺血病理改变、室管膜下区和大脑额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达情况。用酶联免疫法（ELISA）检测右侧大脑匀浆中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）浓度。实验结果:1高血脂合并脑缺血模型的建立本实验选用经典高脂饲料喂养6周造成高脂血症大鼠模型,在此基础上用大脑中动脉FeCl3刺激血栓性闭塞法造成局灶性脑缺血,最终造成高血脂合并脑缺血模型。预实验结果显示,与同时段正常对照组比较,高血脂组4周、6周CHO、LDL-C、TG升高有显着差异,P<0.01,HDL-C没有显着差异。说明高脂饲料喂养4-6周可以造成大鼠高血脂模型。由于高血脂形成时间较长,饲养6周的高血脂症大鼠模型更近似于人类高血脂症的病理变化,正式实验定为6周。正式实验,42天,高脂饮料喂养的各组大鼠的CHO和LDL-C、TG与正常对照组大鼠比较,升高有显着性差异,P<0.01。HLD-C降低有显着性差异,P<0.01。证明高血脂症大鼠造模成功,可以进行实验。52天脑缺血造模后,在MCAO清醒（术后约1h）后,在1～2h内观察模型动物有脑缺血模型出现的神经功能缺失症状,各组大鼠在造模后1～2h的神经症状行为在评定上均有阳性反应,与正常对照组比较均有显着性差异p<0.01。HE染色结果可见,实验组动物脑缺血造模后,缺血灶出现在额叶,位置比较恒定,缺血灶内细胞排列散乱,并见大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,海马区大量神经元变性坏死,排列紊乱,各组有不同程度的神经元脱失现象等病理改变,说明本实验的脑缺血模型制作是成功的。本实验首次建立高血脂合并脑缺血的动物模型,此模型成功率高,死亡率小,重复性好,充分模拟了人类疾病的病理及生理改变。2正常大鼠血脂、HE染色结果、神经干细胞、NSE、神经营养因子的表达正常大鼠CHO 51.92±9.46mg/dL, HDL-C 26.80±8.16 mg/dL,LDL-C 30.50±8.19 mg/dL,TG47.98±12.18 mg/dL。HE染色结果显示,大鼠右侧海马区和额叶皮层神经细胞排列清楚,细胞形态清晰。神经干细胞标志,nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,在正常大鼠右侧脑内表达较少,在前脑背外侧伸展、侧脑室外侧壁可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞（背外侧伸展nestin:阳性细胞数63±9.40;面密度0.62±0.10%;光密度0.50±0.03%。PCNA:阳性细胞数185±10.60;面密度1.93±0.11%;光密度1.22±0.07%。vimentin:阳性细胞数95±6.31;面密度0.61±0.04%;光密度0.34±0.02%。Tuj-1:阳性细胞数56±7.69;面密度0.96±0.13%;光密度0.22±0.03%。侧脑室外侧壁:nestin:阳性细胞数41±5.61;面密度0.35±0.05%;光密度0.23±0.03%。PCNA:阳性细胞数114±22.79;面密度1.25±0.25%;光密度0.94±0.19%。vimentin:阳性细胞数48±11.85;面密度1.05±0.26%;光密度0.58±0.14%。Tuj-1:阳性细胞数35±4.69;面密度0.88±0.12%;光密度0.45±0.06%。）正常对照组大脑右侧额叶皮层相应区域表达更少。（nestin:阳性细胞数14±3.47;面密度0.11±0.03%;光密度0.09±0.02%。PCNA:阳性细胞数58±6.52;面密度0.64±0.07%;光密度0.39±0.04%。vimentin:阳性细胞数56±6.46;面密度0.22±0.03%;光密度0.11±0.01%。Tuj-1:阳性细胞数13±5.14;面密度0.08±0.03%;光密度0.05±0.02%。）右侧大脑匀浆中NSE（41.70±3.47 ng/dL）及神经营养因子NGF（79.36±7.07 pg/ml）、BDNF（5.66±0.86μg/L）、bFGF（51.20±6.05 ng/L）含量呈基础表达。3针刺对实验性高血脂大鼠的治疗作用3.1针刺对实验性高血脂大鼠血脂的作用经针刺治疗后,和高血脂模型组相比,高血脂治疗组大鼠的CHO、LDL-C、TG降低有极显着差异,P<0.01。HLD-C升高有极显着差异,P<0.01。说明针刺能降低实验性高血脂大鼠CHO、LDL-C、TG,升高HLD-C,调节血脂水平。3.2针刺对实验性高血脂大鼠右侧大脑SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1在实验性高血脂造模后大鼠脑内表达较少,在室管膜下区SVZ、背外侧角可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞,额叶皮质表达更少,与正常对照组相比,其阳性细胞数、面密度、光密度没有显着差异,P>0.05。针刺对实验性高血脂大鼠nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达影响不大。3.3针刺对高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中NSE的作用高血脂造模后,右侧脑匀浆中NSE浓度与正常脑匀浆中NSE浓度没有显着差异,P>0.05,说明高血脂本身不能影响右侧脑组织中NSE的分泌与合成。高血脂大鼠治疗组和模型组之间没有显着差异,说明针刺不能影响实验性高血脂大鼠NSE的分泌。3.4针刺对实验性高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组比较,高血脂模型组大鼠大脑匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显降低,P<0.05或P<0.01;与高血脂模型组比较,针刺治疗组BDNF显着升高,P<0.05,NGF、bFGF没有显着差异,P>0.05,但有升高的趋势。实验结果提示高血脂可降低大鼠大脑中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成,针刺可升高高血脂状态某些神经营养因子的含量,如BDNF。4针刺对实验性脑缺血大鼠的治疗作用4.1针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用59天,与正常对照组比较,脑缺血模型组和脑缺血治疗组神经症状评分升高有极显着性差异,p<0.01;与脑缺血模型对照组比较,脑缺血治疗组的神经症状评分降低有极显着性差异,p<0.01。HE染色结果显示,脑缺血治疗组缺血区周围组织水肿减轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。4.2针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用脑缺血后,大鼠缺血侧前脑室管膜下区（背外侧伸展、侧脑室外侧壁）、缺血区额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1强表达,并有多层阳性细胞,背外侧角可见大量的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,并向外形成了背外侧伸展,脑缺血区可见散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。与正常对照组比较,脑缺血模型组、治疗组nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组各项升高均有极显着差异,P<0.01。脑缺血后存在神经干细胞的增殖,并有一部分神经干细胞有向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化的趋向。针刺后各项指标高于脑缺血组。说明针刺可提高实验性脑缺血大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。针刺结果显示,针刺可促进大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。4.3针刺对实验性脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常组相比,脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组大脑匀浆中NSE含量降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示:脑缺血后,脑匀浆中NSE浓度显着升高,说明出现脑损伤。针刺可降低NSE浓度,从而减轻脑损伤。4.4针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常组相比,脑缺血模型组缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显上升,有显着性差异,P<0.05;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组缺血侧脑组织匀浆中NGF、bFGF含量升高有显着差异,P<0.05或P<0.01。实验结果提示脑缺血后,缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF浓度显着升高,说明脑缺血后,自身可分泌神经营养因子,从而产生一定的脑保护作用。针刺可通过促进缺血侧大脑NGF、bFGF的分泌与合成,加强脑保护作用。5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠的治疗作用5.1针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠血脂的作用经针刺治疗后,与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组、Ⅱ组CHO、LDL-C升高有极显着性差异,P<0.01;高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅱ组TG升高,有极显着性差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组CHO、TG、LDL-C降低有显着性差异,P<0.01或P<0.05,治疗Ⅱ组没有显着差异,P>0.05;与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组CHO、LDL-C、TG没有显着差异,P>0.05;HDL-C,各组之间比较没有显着差异,P>0.05,但与42天比较,治疗Ⅰ组HDL-C升高有显着差异,P<0.01。本实验表明,针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,高血脂合并脑缺血模型治疗治疗Ⅰ组疗效好于治疗Ⅱ组,从而说明从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平。5.2针刺对实验性高血脂合并脑缺血脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用与合并模型组比较,合并治疗组神经症状评分显着降低,p<0.05;与合并治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组没有显着差异,p>0.05,说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。针刺后缺血区HE结果显示,针刺后缺血区周围组织水肿减轻。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组水肿程度最轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明电针在高血脂成模后积极治疗可减轻脑损害。5.3针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用高血脂合并脑缺血模型组前脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、额叶缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达弱于单纯脑缺血模型组。与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅱ组各项降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示高血脂可减弱脑缺血后nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达。即高血脂可减弱脑缺血后神经干细胞的增殖,迁移和分化。针刺可提高高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比Ⅱ组各项表达要强,说明在高血脂阶段介入治疗,更能提高nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。针刺结果显示,针刺可促进高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。说明在高血脂阶段介入治疗,更能促进神经干细胞的增殖,分化和迁移。5.4针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常对照组和脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量显着上升,有显着性差异,P<0.05,P<0.01。与正常对照组相比,合并各组缺血侧大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与合并模型组比较,合并治疗Ⅰ组、Ⅱ组下降有显着差异P<0.01,P<0.05;与高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组升高有显着差异P<0.05。实验结果提示,高血脂合并脑缺血可加重脑缺血后脑损伤,针刺可减低高血脂合并脑缺血大鼠的脑损伤,尤其在高血脂阶段介入针刺治疗的治疗Ⅰ组疗效远远好于治疗Ⅱ组。5.5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组、脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组NGF、BDNF、bFGF降低有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组NGF、bFGF上升有显着差异P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组NGF、BDNF降低有显着差异P<0.01。实验结果提示:高血脂可降低脑缺血后脑自身的保护作用,针刺可通过促进NGF、BDNF、bFGF的分泌和合成,从而起到脑保护的作用。针刺治疗Ⅰ组的NGF、BDNF高于Ⅱ组,说明在高血脂阶段积极进行针刺治疗可更好的提高神经营养因子分泌,从而起到脑保护的作用。实验结论:1高血脂合并脑缺血模型的建立是成功的。2高血脂本身并不能影响实验性高血脂大鼠右侧室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑匀浆中NSE的表达,但能降低右侧大脑匀浆中神经营养因子,如NGF、BDNF、bFGF的分泌。3脑缺血能增强实验性脑缺血大鼠缺血侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。4高血脂合并脑缺血,可减弱脑缺血后室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织NSE的分泌,降低缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,减弱大脑的自我保护作用。5针刺“丰隆”、“三阴交”,可降低实验性高血脂大鼠CHO、TG、LDL-C,升高HDL-C水平。针刺不能影响实验性高血脂大鼠高血脂后大脑右侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑组织中NSE的分泌,但能促进右侧脑组织中BDNF的分泌与合成。6针刺“百会”“人中”可改善实验性脑缺血大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,降低缺血侧NSE的分泌,增强实验性脑缺血大鼠缺血侧大脑室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进大脑缺血侧脑组织NGF、bFGF的分泌与合成。7针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,改善高血脂合并脑缺血模型大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,可提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。8从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平,改善脑缺血状态,明显提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧大脑NSE的分泌,促进缺血侧大脑匀浆中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。9针刺能通过促进缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,降低NSE分泌,促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,从而促进神经元的修复和再生。综上所述本实验结果显示,神经营养因子和神经干细胞增殖、迁移、分化之间存在必然联系。在实验性脑缺血和实验性高血脂合并脑缺血大鼠脑缺血造模后,神经营养因子含量的升高,往往同神经干细胞的增殖同时出现,所以猜测本实验脑缺血后是神经营养因子的升高促进了神经干细胞的增殖、迁移和分化。实验结果表明,针刺作为一种治疗手段在一定程度上促进了神经营养因子的分泌,从而最终促进了脑缺血后神经干细胞增殖、迁移、分化,尤其在高血脂阶段针刺治疗可减轻脑缺血后损伤,促进神经元的修复与再生。
二、神经干细胞研究的新进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、神经干细胞研究的新进展（论文提纲范文）
（1）仿生静电纺水凝胶纤维束支架用于脊髓损伤修复的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 GELMA水凝胶生物支架的制作及其材料结构和性能表征 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第二部分 GELMA水凝胶生物支架促进BMSCS和神经元的粘附和体外迁移的研究 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第三部分 CELMA水凝胶生物支架促进脊髓损伤修复的研究 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、结果 |
| 四、结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 明胶及甲基丙烯酸化水凝胶的制备及应用 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间已发表的论文、专利和学术获奖 |
| 主持或参与的科研项目 |
| 参加学术会议情况 |
| 致谢 |
（2）低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、LIPUS激励iPS-NSCs最佳物理参数的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验器械 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 1.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 1.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 1.1.6 CCK-8 检测iPS-NSCs增殖活性 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 成功搭建低强度脉冲超声激励系统 |
| 1.2.2 iPS-NSCs细胞的形态学观察及细胞鉴定 |
| 1.2.3 LIPUS对 iPS-NSCs增殖活性的影响以及最佳激励条件的确定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 LIPUS在生物组织中的理学效应及其在骨科学中的应用 |
| 1.3.2 神经干细胞在神经系统中的起源、特点和作用 |
| 1.3.3 诱导神经干细胞的来源及诱导体系 |
| 1.3.4 LIPUS对细胞增殖的作用 |
| 1.4 小结 |
| 二、在最佳生物学参数下,LIPUS优化iPS-NSCs细胞特性的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验器械 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 2.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 2.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 2.1.6 TUNEL检测iPS-NSCs细胞凋亡的情况 |
| 2.1.7 ELISA检测iPS-NSCs细胞上清液中神经营养因子的含量 |
| 2.1.8 Western Blot检测Notch信号通路及细胞分化情况 |
| 2.1.9 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞凋亡率的变化 |
| 2.2.2 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞中NTFs含量的变化 |
| 2.2.3 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞分化的情况 |
| 2.2.4 LIPUS激励iPS-NSCs后 Notch信号通路相关蛋白含量的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 LIPUS对 iPS-NSCs细胞生物特性的影响 |
| 2.3.2 LIPUS激励iPS-NSCs可能的作用机制 |
| 2.3.3 LIPUS修复神经损伤的潜力 |
| 2.4 小结 |
| 三、LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验器械 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 脊髓损伤动物模型建立 |
| 3.1.4 细胞移植 |
| 3.1.5 BBB运动功能评分 |
| 3.1.6 脊髓标本取出及制作切片 |
| 3.1.7 石蜡切片的制备 |
| 3.1.8 HE染色 |
| 3.1.9 免疫荧光观察移植细胞在体内分化情况 |
| 3.1.10 ELISA检测测定脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.1.11 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 HE染色结果 |
| 3.2.2 GFAP、NF200 免疫荧光染色结果 |
| 3.2.3 脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.2.4 BBB评分结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 脊髓损伤动物模型的制备及运动功能评价指标的选择 |
| 3.3.2 NSCs在脊髓损伤修复中的作用及应用 |
| 3.3.3 多潜能干细胞在神经损伤等再生医学方面的应用 |
| 3.3.4 LIPUS介导的iPSc-NSCs修复脊髓损伤可能的作用机制 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 低强度脉冲超声在神经修复中的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）人脐带间充质干细胞外泌体在脊髓损伤中的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 间充质干细胞在损伤修复中的作用 |
| 1.1.1 间充质干细胞 |
| 1.1.2 间充质干细胞与组织再生修复 |
| 1.1.3 间充质干细胞与脊髓损伤修复 |
| 1.2 外泌体的合成与生物功能 |
| 1.2.1 外泌体的合成和释放 |
| 1.2.2 外泌体的生物结构和功能 |
| 1.3 干细胞外泌体与组织损伤修复 |
| 1.3.1 干细胞外泌体在组织损伤修复中的应用优势 |
| 1.3.2 干细胞外泌体在组织损伤修复中的应用 |
| 1.3.3 间充质干细胞外泌体与脊髓损伤修复 |
| 1.3.4 干细胞及干细胞外泌体在神经系统损伤中的应用前景 |
| 1.4 科学问题的提出 |
| 第二章 研究目的、实验方案及意义 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 实验方案设计 |
| 2.2.1 hucMSC-Exs修复SD大鼠脊髓横断损伤模型的构建 |
| 2.2.2 hucMSC-Exs对脊髓横断损伤修复效果评价 |
| 2.2.3 hucMSC-Exs在损伤脊髓中促进神经电信号上下行传导疗效分析 |
| 2.2.4 hucMSC-Exs抑制炎症的效果分析 |
| 2.2.5 hucMSC-Exs对神经纤维外展和体外突触再塑的作用研究 |
| 2.2.6 hucMSC-Exs对神经干细胞迁移作用的研究 |
| 2.2.7 hucMSC-Exs对神经干细胞体外增殖和分化的作用研究 |
| 2.2.8 hucMSC-Exs促进神经干细胞增殖和分化的分子机制研究 |
| 2.3 实验意义 |
| 第三章 人脐带间充质干细胞外泌体在大鼠脊髓横断损伤修复中的作用研究 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 所用细胞 |
| 3.1.2 所用动物 |
| 3.1.3 所用仪器 |
| 3.1.4 所用试剂及材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 人脐带间充质干细胞外泌体的提取 |
| 3.2.3 总蛋白的提取 |
| 3.2.4 Western blot蛋白印记 |
| 3.2.5 Nanosight粒径分析 |
| 3.2.6 透射电镜分析 |
| 3.2.7 大鼠脊髓横断模型的建立 |
| 3.2.8 大鼠后肢运动功能评分(BBB score) |
| 3.2.9 免疫组织化学染色 |
| 3.2.10 荧光金逆行标记 |
| 3.2.11 HE染色 |
| 3.2.12 TUNEL染色 |
| 3.2.13 小动物活体成像 |
| 3.2.14 ELISA检测TNF-α和IL-1β |
| 3.2.15 诱导神经元神经纤维外展 |
| 3.2.16 免疫荧光染色 |
| 3.2.17 统计分析 |
| 3.3 研究结果 |
| 3.3.1 外泌体的鉴定 |
| 3.3.2 SD大鼠脊髓横断损伤模型的建立 |
| 3.3.3 SD大鼠脊髓横断损伤hucMSC-Exs修复模型的建立 |
| 3.3.4 hucMSC-Exs修复SD大鼠脊髓横断损伤修复效果评价 |
| 3.3.5 hucMSC-Exs保护受损脊髓组织并抑制神经胶质增生 |
| 3.3.6 hucMSC-Exs减轻了模型大鼠的炎症反应 |
| 3.3.7 hucMSC-Exs抑制神经轴突外展 |
| 讨论 |
| 第四章 hucMSC-Exs促进神经干细胞增殖和分化的研究 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 所用细胞 |
| 4.1.2 所用动物 |
| 4.1.3 所用仪器 |
| 4.1.4 所用试剂及材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 神经干细胞培养 |
| 4.2.2 神经干细胞迁移 |
| 4.2.3 细胞总蛋白的提取 |
| 4.2.4 神经干细胞球形成检测 |
| 4.2.5 神经干细胞活力检测(MTS) |
| 4.2.6 神经干细胞(Ki-67)检测 |
| 4.2.7 神经干细胞分化检测 |
| 4.2.8 神经干细胞ERK1/2 通路活化检测 |
| 4.3 研究结果 |
| 4.3.1 神经干细胞的体外培养 |
| 4.3.2 hucMSC-Exs不能影响神经干细胞体内外迁移 |
| 4.3.3 hucMSC-Exs促进神经干细胞增殖 |
| 4.3.4 hucMSC-Exs促进神经干细胞分化 |
| 4.3.5 hucMSC-Exs对神经干细胞增殖和分化的作用研究 |
| 讨论 |
| 第五章 实验结论和展望 |
| 实验结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间的科研成果 |
| 1 发表论文情况 |
| 2 参与发明专利情况 |
（4）干细胞在眼科临床和基础研究中的相关进展（论文提纲范文）
| 1 眼科研究中涉及的相关干细胞研究 |
| 1.1 胚胎干细胞 |
| 1.2 视网膜干/祖细胞 |
| 1.3 眼前节干细胞 |
| 1.3.1 角膜缘干细胞 |
| 1.3.2 结膜干细胞 |
| 1.3.3 小梁网干细胞 |
| 1.3.4 骨髓间充质干细胞 |
| 1.3.5 神经干细胞 |
| 2 干细胞的分化 |
| 3 干细胞眼内移植 |
| 4 需要继续研究的相关问题 |
（5）神经干细胞移植治疗缺血性脑卒中的实验研究（论文提纲范文）
| 序 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 新生小鼠海马、嗅球、皮层神经干细胞分离培养及鉴定 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.2.1 材料 |
| 1.2.2 主要溶液的配配制 |
| 1.2.3 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 神经干细胞生长及形态学观察 |
| 1.3.2 神经干细胞特异性标志物NESTIN、CD133免疫荧光鉴定 |
| 1.3.3 神经干细胞诱导分化及免疫荧光染色 |
| 1.3.4 Brd U掺入神经干细胞增殖能力的鉴定 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 糖氧剥夺对神经干细胞增殖、分化、凋亡的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 神经干细胞分离培养鉴定 |
| 2.3.2 缺氧对神经干细胞分化能力的影响 |
| 2.3.3 缺氧对神经干细胞增殖能力的影响 |
| 2.3.4 缺氧对神经干细胞凋亡的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型的实验研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 实验动物数量分析 |
| 3.3.2 定点光栓建模的验证 |
| 3.3.3 病理学变化 |
| 3.3.4 梗死体积 |
| 3.3.5 Fluoro-Jade C染色结果 |
| 3.3.6 行为学测试结果 |
| 3.4 讨论 |
| CHAPTER.4 NEURAL STEM CELL TRANSPLANTATION PROMOTESBEHAVIORAL RECOVERY ON PHOTOTHROMBOSIS STROKE MODEL |
| 4.1 INTRODUCTION |
| 4.2 MATERIALS AND METHODS |
| 4.2.1.Animals |
| 4.2.2.NSC Culture |
| 4.2.3.NSC Differentiation |
| 4.2.4.Intracerebral Transplantation |
| 4.2.5.Photothrombosis model |
| 4.2.6 Fluoro-Jade C staining |
| 4.2.7 Behavioral tests |
| 4.2.8 Nissl staining |
| 4.2.9 Statistical analysis |
| 4.3 RESULTS |
| 4.3.1 Hippocampal neurosphere formation and differentiationin vitro |
| 4.3.2 Pathology of photothrombosis model |
| 4.3.3 Transplantation of neural stem cells reduced infarctsize after ischaemic stroke |
| 4.3.4 Transplantation of neural stem cells improvedbehavioural performance after ischaemic stroke |
| 4.3.5 Survival and differentiation of grafted neural stemcells in vivo |
| 4.4 DISCUSSION |
| 综述一 神经再生机制及其调控与临床应用 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 生理状态下的神经再生与病理状态下的神经再生机制 |
| 5.2.1 生理状态下的神经再生机制 |
| 5.2.2 病理状态下的神经再生机制 |
| 5.3 神经再生的调控 |
| 5.3.1 神经递质对神经再生的调控作用 |
| 5.3.2 免疫调节对神经再生的调控作用 |
| 5.3.3 细胞间信号转导对神经再生的调控作用 |
| 5.4 神经再生在中枢神经系统疾病中的应用 |
| 5.4.1 替代策略中细胞供体细胞的选择 |
| 5.4.2 替代策略现状 |
| 5.5 总结 |
| 综述二 神经干细胞移植研究新进展 |
| 6.1.前言 |
| 6.2 供体细胞来源及选择 |
| 6.2.1 成体神经干细胞池 |
| 6.2.2 不同来源的神经干细胞 |
| 6.3 移植方式最新进展 |
| 6.3.1 联合策略在替代疗法中的应用 |
| 6.3.2 共移植策略在替代疗法中的应用 |
| 6.4 神经干细胞移植时间窗、移植途径的选择 |
| 6.4.1 神经干细胞移植时间窗的选择 |
| 6.4.2 移植路径的选择 |
| 6.5 现状及展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）立体定向神经干细胞移植术在颅脑损伤治疗中的疗效分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 资料与方法 |
| 1 研究对象纳入标准及排除标准 |
| 2 细胞与仪器 |
| 3 治疗方法 |
| 4 研究方法 |
| 5 术后疗效观察 |
| 6 统计学处理 |
| 研究结果 |
| 1 术前与术后 6 月格拉斯哥昏迷评分比较 |
| 2 手术缓解率与性别、年龄的关系 |
| 3 手术前后 FIM 评分比较 |
| 4 移植前后白细胞、肝细胞、肾功能及电解质的变化情况 |
| 5 临床主要症状的改善 |
| 6 神经干细胞移植术后不良反应 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间研究成果 |
（7）猕猴胚胎源性神经干细胞诱导、脑内移植及其在青光眼玻璃体内的转归—探索性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 研究背景 |
| 参考文献 |
| 第一部分 猕猴胚胎源性神经干细胞的诱导分化、干性维持及脑内移植 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 神经干细胞移植对脑外伤大鼠神经功能恢复、细胞凋亡及凋亡基因表达的影响 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 适用神经干细胞移植研究的青光眼视神经损伤模型的建立 |
| 引言 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 兔青光眼视神经损伤后移植神经干细胞的探索研究 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 单侧青光眼视神经损伤后眼外肌及其本体感受器病理学改变 |
| 引言 |
| 材料及方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 本课题的创新点及其意义 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）神经干细胞的治疗应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 神经干细胞概念和生物学理论 |
| 1.1 神经干细胞概念 |
| 1.2 生物学理论 |
| 2 神经干细胞 |
| 2.1 神经干细胞的来源 |
| 2.2 胚胎神经干细胞 |
| 2.3 成体神经干细胞 |
| 3 神经干细胞治疗应用展望 |
（10）针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语（abbeviations） |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针刺治疗高血脂的研究进展 |
| 1 中医对高脂血症认识 |
| 2 高血脂的病因病机 |
| 3 针刺治疗高血脂的临床研究 |
| 4 针刺治疗高血脂的实验研究 |
| 5 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医学对中风病的认识 |
| 1 病名 |
| 2 病位 |
| 3 病因 |
| 4 促发因素 |
| 5 临床症状 |
| 6 辨证施治 |
| 7 预后 |
| 8 针灸在治疗中风中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述三 针刺对实验性脑缺血作用机制的研究进展 |
| 1 针刺对脑缺血合并症的实验研究 |
| 2 针刺抗脑缺血的作用机制研究 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述四 神经干细胞与脑缺血 |
| 1 神经干细胞的发现 |
| 2 神经干细胞的概念 |
| 3 神经干细胞的生物学特性 |
| 4 神经干细胞的定位和标记 |
| 5 脑缺血与NSC 的激活 |
| 6 脑缺血时影响NSC 增殖的因素 |
| 7 针灸与脑缺血后神经干细胞的研究现状 |
| 8 研究展望与科学意义 |
| 参考文献 |
| 综述五 神经营养因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 1 神经干细胞分化及其相关因子 |
| 2 NGF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 2.1 NGF |
| 2.2 BDNF |
| 3 GDNF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4 其他生长因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4.1 bFGF |
| 4.2 其他生长因子 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 电针对实验性高血脂大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对实验性脑缺血神经行为及脑缺血病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| HE 染色图 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Nestin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Nestin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠PCNA 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| PCNA 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Vimentin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Tuj-1 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Tuj-1 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经营养因子NGF、BDNF、bFGF 的影响.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 实验结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、神经干细胞研究的新进展（论文参考文献）
- [1]仿生静电纺水凝胶纤维束支架用于脊髓损伤修复的研究[D]. 陈春茂. 苏州大学, 2019(04)
- [2]低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究[D]. 吴秋丽. 天津医科大学, 2019(02)
- [3]人脐带间充质干细胞外泌体在脊髓损伤中的作用及机制[D]. 胡新远. 江苏大学, 2019(03)
- [4]干细胞在眼科临床和基础研究中的相关进展[J]. 杜军辉,李蓉,宋杨. 临床和实验医学杂志, 2018(05)
- [5]神经干细胞移植治疗缺血性脑卒中的实验研究[D]. 马浚宁. 兰州大学, 2016(11)
- [6]立体定向神经干细胞移植术在颅脑损伤治疗中的疗效分析[D]. 王鹏. 延安大学, 2014(02)
- [7]猕猴胚胎源性神经干细胞诱导、脑内移植及其在青光眼玻璃体内的转归—探索性研究[D]. 郭立云. 昆明医科大学, 2013(12)
- [8]胶质瘤干细胞研究的新进展及展望[J]. 于士柱,王虔. 中华病理学杂志, 2012(04)
- [9]神经干细胞的治疗应用研究进展[J]. 刘楠,周柏玉. 陕西医学杂志, 2011(05)
- [10]针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响[D]. 任秀君. 北京中医药大学, 2007(02)