一、沙土鼠全脑缺血再灌流时不同脑区聚胺代谢变化的动态观察（论文文献综述）
朱蓓蕾[1]（2018）在《ERK通路介导的高尔基体应激在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制》文中研究表明研究背景:脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI）是指脑血流中断后恢复灌注,在改善缺血组织血供、挽救濒死神经细胞的同时,对神经细胞产生快速的级联反应损伤,通过一系列复杂作用,最终导致神经细胞凋亡的病理过程。CIRI是急性缺血性卒中（acute ischemic stroke,AIS）常见并发症。CIRI发病机制复杂,氧化应激（Oxidative Stress,OS）是其中最主要的病理反应。文献报道高尔基体（Golgi apparatus,GA）在氧化应激中参与转导应激信号,触发调亡,称之为GA应激（Golgi Apparatus Stress,GAS）。目前已有研究发现MAPK/ERK通路在氧化应激中激活,通过磷酸化高尔基体结构蛋白GRASP65,导致高尔基体解聚、裂解。但现有研究以离体细胞试验居多,在CIRI中是否也可通过ERK通路引起GA应激研究更少。丁苯酞（消旋-3-正丁基苯酞,Dl-3-n-butylphthalide NBP）是我国自行研制的治疗脑缺梗死的药物,动物研究证实具有减轻小血管痉挛、改善缺血区微循环,提高缺血区脑灌注、保护神经元线粒体、抑制血小板聚集等多种作用,常用于CIRI。是目前全球唯一具有线粒体保护作用的脑微循环重构剂,但其是否对同为细胞器的高尔基体具有保护作用不得而知。研究目的:旨在在离体细胞及在体动物水平证实CIRI中是否存在ERK通路激活,通过高尔基体结构蛋白GRASP65的磷酸化,介导高尔基体应激,从而导致高尔基体解聚。进而探寻氧化应激发生的新靶点和新机制,为减轻CIRI寻找切实有效的干预靶点。并探讨NBP是否可通过抑制ERK通路减轻GA应激。研究方法:培养小鼠大脑皮层神经元细胞;建立氧糖剥夺/复氧（Oxygen-glucosedeprivation/reoxygenation,OGD/R）模型;CCK8法检测细胞活性;免疫荧光激光共聚焦观察OGD/R模型高尔基体形态变化及GRASP65、pGRASP65的表达,明确CIRI中是否存在高尔基应激。在此基础上再进行两部分研究。第一部分离体细胞试验:分为对照组、OGD/R组、药物预处理组;其中OGD/R组、药物预处理组按时间点不同分为4h、12h、24h三个亚组;干预药物丁苯酞（DL-3-n-butylphthalide,NBP）。免疫荧光激光共聚焦观察各组GRASP65、pGRASP65的表达及高尔基体形态。Western blot技术检测各组GRASP65、pGRASP65、ERK及pERK的表达。第二部分在体动物试验:采用改良四血管阻断法建立脑缺血再灌注（Ischemia-reperfusion,I/R）的ICR小鼠模型。分成假手术组、I/R对照组、预处理组、治疗组、预处理+治疗组;干预药物NBP。HE染色法观察再灌注5d后的各组小鼠神经细胞形态学变化。TTC染色法估算再灌注5d后各组小鼠脑组织缺血体积。神经损害严重程度评分量表（neurological severity score,NSS）14分制评价再灌注5d后的各组小鼠神经行为学。分别用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定再灌注5d后各组小鼠脑组织中SOD、MDA含量。Western blot技术检测各组再灌注5d后各组小鼠脑组织中ERK、pERK、GRASP65及pGRASP65的表达。结果:在OGD/R模型中,免疫荧光激光共聚焦发现高尔基体形态发生变化,显示在CIRI中存在高尔基体应激。离体细胞部分:Western blot检测:ERK、GRASP65在各组中表达无明显变化（P>0.05）。pERK、pGRASP65在各组中的表达出现了明显变化:在OGD/R组中,pERK、pGRASP65在12h和24h表达均较对照组有显着升高（P<0.01）。NBP预处理后,pERK、pGRASP65在12h和24h表达均较同时间点OGD/R组显着降低（P<0.01）,提示阻断ERK活化可以抑制CIRI中GRASP65的磷酸化。免疫荧光激光共聚焦:在正常对照组中,GRASP65荧光标记的高尔基体结构较紧密,pGRASP65未见明显表达。OGD/R4h组pGRASP65出现表达,提示部分GRSP65发生磷酸化;OGD/R12h组pGRASP65表达增强;OGD/R24h组pGRASP65表达较12h组无明显改变。同时OGD/R组见高尔基体结构松散,部分碎裂。NBP预处理后,pGRASP65表达较同时间点OGD/R组显着降低（P<0.01）,提示NBP干预可以抑制GRASP65磷酸化。同时高尔基体结构也较OGD/R组有改变,未见明显高尔基体碎裂。提示抑制ERK的活化可改善高尔基体在氧糖剥夺/复氧损伤中的形态。在体动物部分:再灌注5d后的各组小鼠NSS评分结果:I/R组显着高于假手术组、NBP预处理+治疗组及预处理组（P<0.01及P<0.05）;I/R组与NBP治疗组NSS评分相比无显着性差异（P>0.05）。再灌注5d后各组小鼠的HE染色结果:假手术组细胞排列紧密,细胞核形态正常,染色均匀;I/R组细胞排列松散,神经元变性;NBP干预后各组细胞形态明显较I/R组改善。预处理+治疗组优于预处理组优于I/R组。再灌注5d后各组小鼠的TTC染色结果:假手术组红染面积均匀,几乎所有组织均染色,提示几乎无梗死;I/R组梗死体积较假手术组显着增多（P<0.01）;NBP干预后各组梗死体积较I/R组显着减少（P<0.01）。再灌注5d后各组小鼠脑组织中SOD含量结果:I/R组SOD表达水平显着低于假手术组（P<0.01）;NBP干预各组SOD表达水平显着高于I/R组（P<0.01）。再灌注5d后各组小鼠脑组织中MDA含量结果:I/R组MDA表达水平显着高于假手术组（P<0.01）;NBP干预各组MDA表达水平都有所降低,I/R组显着高于NBP预处理+治疗组及预处理组（P<0.01及P<0.05）;I/R组与NBP治疗组MDA含量无显着性差异（P>0.05）。Western blot检测再灌注5d后各组小鼠脑组织中ERK、pERK、GRASP65及pGRASP65的表达结果:ERK、GRASP65在各组中表达无显着差异（P>0.05）;pERK的表达在各组中出现了显着差异:I/R组与假手术组相比显着增高（P<0.01）,与NBP干预各组相比显着增高（P<0.01及P<0.05）,pGRASP65在各组的变化趋势与pERK一致。结论:1.ERK通路在CIRI中被激活,参与介导了CIRI,阻断ERK的活化对CIRI具有延缓和减轻作用。2.CIRI中GRASP65在ERK的介导下发生磷酸化。3.CIRI中高尔基体结构发生改变（即高尔基体应激）,其变化与ERK介导的GRASP65磷酸化相关联。4.NBP可能通过阻断ERK信号通路介导的GRASP65的磷酸化过程减轻CIRI。
王泽锋[2]（2014）在《丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究》文中研究说明目的:采用先进的正电子发射断层显像技术（PET）来研究丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,并探究其内在的治疗机制,为进一步的临床应用提供参考。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型（MCAO）,随机分成假手术组（假手术组除不插入线栓外其余手术步骤与MCAO模型相同）,模型组,丹红低剂量组（1mL/kg/d）,丹红中剂量组（2mL/kg/d）,丹红高剂量组（4mL/kg/d）。治疗组的实验动物每天腹腔注射丹红注射液,其他组每天腹腔注射生理盐水,持续14 d。各组实验动物分别在造模后1d、3d、7 d、10 d以及14 d进行神经行为学评价;在造模后1 d、7 d、14 d采用大鼠脑部的FDG-PET扫描检测其脑部葡萄糖代谢功能的恢复情况;在造模后3 d用ELISA法检测脑组织中的白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-a（TNF-a）含量;在造模后7 d用TTC染色来评价梗死面积;在造模后14 d用免疫组化检测梗死区周围神经元特异性核蛋白（NeuN）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、血管性血友病因子（vWF）、葡萄糖转运体1（GLUT1）的表达。结果:（1）与模型组相比,丹红注射液治疗组的神经功能缺损评分显着升高,尤其是丹红中剂量组和高剂量组（P<0.01）,同时其梗死体积也较为显着地减少（P<0.01）。（2）与模型组相比,丹红注射液治疗组的梗死侧组织中TNF-a含量显着降低（P<0.01）,丹红中、高剂量组的梗死侧组织中IL-1β含量也显着地减少（P<0.05）。（3）FDG-PET能够有效地监测脑部的葡萄糖代谢的变化来了解脑功能的变化情况。与模型组相比,丹红注射液治疗组的右侧梗死区的葡萄糖代谢显着增加（P<0.05）,尤其丹红中、高剂量组梗死区的葡萄糖代谢在7d和14d显着增加（P<0.01）。（4）免疫组化检测梗死区周围的NeuN、GFAP、vWF、GLUT1的表达来阐释丹红注射液对于大鼠脑缺血模型的神经细胞再生,星形胶质细胞活性,微血管重塑和葡萄糖代谢恢复的影响。与模型组相比,丹红中、高剂量组NeuN和vWF的阳性细胞数显着增多（P<0.05）,其GFAP的积分光密度（IOD）值显着升高（P<0.01）。同时,丹红治疗组中GLUT1的IOD值较模型组相比均显着降低（P<0.05）。结论:（1）丹红注射液促进了大鼠脑缺血后葡萄糖代谢的恢复,梗死体积的减少以及神经功能的恢复。（2）丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其保护机制与抑制炎性因子的释放,微血管重塑,神经细胞再生,星形胶质细胞活化以及促进葡萄糖利用率的恢复有关。
储丹晨[3]（2014）在《黄蒲通窍胶囊对全脑缺血再灌注大鼠认知行为及神经再生的影响》文中研究指明目的：建立全脑缺血再灌注大鼠模型，观察具有益气补肾、豁痰开窍、活血通络功效的黄蒲通窍胶囊对脑缺血大鼠神经行为、学习记忆及海马齿状回区神经细胞的增殖、分化、存活的影响。方法：本研究采用四动脉结扎法建立全脑缺血/再灌注大鼠模型。将成年健康雄性SD大鼠60只随机分为假手术组、脑缺血组（空白对照组）和脑缺血+黄蒲通窍胶囊组（黄蒲通窍组），每组20只。每组由专人按神经功能缺损评分（neurogical severityscores, NSS）标准对各组大鼠进行神经功能缺损评分，予以旷场实验（open field test,OFT）观察自由运动、Morris水迷宫（Morris Water Maze, MWM）观察空间学习记忆能力。并运用5-溴-2-脱氧尿嘧啶（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）掺入法、免疫荧光组织化学法来观察黄蒲通窍胶囊对全脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区神经细胞的增殖、分化、存活的影响。结果：（1）神经功能缺损评分：假手术组无神经功能损伤，缺血组大鼠NSS评分在缺血再灌注后6小时较假手术组大鼠升高（P <0.01），黄蒲通窍组在缺血损伤后第3天、第7天与缺血组相比，虽然得分的水平较低，但无统计学差异（P＞0.05）。（2）旷场试验评分：第7天、第14天、第21天评分结果显示，黄蒲通窍组、脑缺血组与假手术组均具有统计学差异（P＜0.01）。在观测的第7天，黄蒲通窍组与脑缺血组相比较虽然得分的水平较低，但并无统计学差异（P＞0.05），在观测的第14天，脑缺血组与黄蒲通窍组具有统计学的差异（P＜0.05），在观测的第21天，脑缺血组与黄蒲通窍组具有极其显着的统计学差异（P＜0.01）。（3）隐藏平台实验：随着水迷宫训练天数的增加，在训练后第3到5天，黄蒲通窍组大鼠逃避潜伏期较脑缺血组大鼠明显的缩短（P <0.01）。（4）空间探索实验：脑缺血组、黄蒲通窍组大鼠与假手术组相比，穿越原平台位置的次数明显减低，具有统计学差异（P <0.05），黄蒲通窍组大鼠穿越原平台位置的次数与缺血组大鼠相比显着增加（P <0.01）。（5）缺血后第7天，脑缺血组、黄蒲通窍组与假手术组比较，海马齿状回颗粒下层新增殖的神经细胞明显增多（P＜0.01）。黄蒲通窍组与脑缺血组比较，新增殖的神经细胞数目无明显差异（P＞0.05）。脑缺血后第28天，可见脑缺血组、黄蒲通窍组仍有存活的新生细胞存在，且黄蒲通窍组存活的新生细胞明显多于脑缺血组（P＜0.01）。（6）脑缺血后第28天，脑缺血组新生的神经元较假手术组明显增加（P＜0.01），黄蒲通窍组新生神经元数目较脑缺血组显着升高（P＜0.01）。结论：（1）脑缺血再灌注模型大鼠具有明显的神经功能缺损症状，且表现出神经过度兴奋性、自主活动降低，还伴有不同程度的空间学习记忆能力损害；（2）黄蒲通窍胶囊能改善大鼠空间学习记忆能力，且能降低全脑缺血损伤造成的大鼠神经过度兴奋性及提高大鼠的自主活动性；（3）黄蒲通窍胶囊的作用不是促进脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区神经细胞的增殖，而是促进新生细胞的存活和向神经元分化。因此，我们推测黄蒲通窍胶囊改善大鼠认知行为学可能与其促进大鼠海马齿状回区新生细胞的存活和向神经元分化相关。
李战永[4]（2012）在《H2S对大鼠缺血性神经损伤的保护作用及机制研究》文中认为目的通过在体实验观察外源性硫化氢（H2S）对大鼠海马CA1区锥体细胞和大鼠胶质瘤细胞在缺血损伤时的保护作用，并探讨相关机制。方法⑴40只雄性wistar大鼠随机分成4组：假手术组、缺血组、H2S组、缺血+H2S组，每组10只。采用双侧颈总动脉永久结扎（2VO）的方法建立慢性脑缺血大鼠模型；H2S组和缺血+H2S组大鼠给予腹腔注射NaHS（5.6mg/kg/day）处理。利用Morris水迷宫实验（MWM）观察比较各组大鼠空间学习、记忆能力；各组大鼠在MWM测试后分别断头取脑，测定海马内H2S含量；通过组织学方法（HE染色）观察各组大鼠海马CA1区锥体细胞的形态结构。⑵32只雄性wistar大鼠随机分为4组，每组8只，分组及处理方法同⑴。在体记录各组大鼠海马CA3、CA1区的局部场电位，用计算神经生物学方法分析大鼠海马CA3、CA1区神经网络的振荡模态（包括θ波段和γ波段）并进行比较；分别在体记录各组大鼠海马CA1区的长时程增强（LTP），并用免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区生长相关蛋白（GAP-43）的表达情况。⑶40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成4组：假手术组，H2S组，肿瘤组，肿瘤+H2S组，每组10只。选用大鼠C6胶质瘤细胞系，通过纹状体内微量细胞注射的方法建立大鼠恶性胶质瘤（GBM）动物模型，H2S组和肿瘤+H2S组大鼠在脑内注射1周后给予腹腔注射NaHS（5.6mg/kg）1次；脑内注射3周后，各组大鼠分别断头取脑，肿瘤侧半脑用于制备冰冻切片，HE染色观察瘤内细胞形态，并计算瘤体体积；免疫组化染色观察瘤内血管内皮标记蛋白CD34、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和金属基质蛋白酶-2（MMP-2）的阳性表达情况，评估瘤体内微血管密度（MVD）；肿瘤对侧半脑用于脑内H2S含量测定。结果⑴慢性脑缺血大鼠海马内H2S含量显着降低（缺血组vs.假手术组，P＜0.05）；经外源性H2S处理后，慢性脑缺血大鼠海马内的H2S含量显着升高（缺血+H2S组vs.缺血组，P＜0.05），但仍低于假手术组（缺血+H2S组vs.假手术组，P＜0.05）。⑵MWM结果表明，与假手术组大鼠相比，缺血组大鼠的逃避潜伏期明显延长（P＜0.01），目标象限百分比显着减少（P＜0.001），穿越平台次数明显减少（P＜0.001）；经外源性H2S腹腔注射处理后，缺血+H2S组大鼠的逃避潜伏期（秒）明显缩短（定位巡航第5天，缺血组与缺血+H2S组相比为：15.91±2.51vs.8.09±1.50，P＜0.01），目标象限百分比（%）明显增加（缺血组与缺血+H2S组相比为：27.27±3.37vs.37.25±3.92，P＜0.05），穿越平台次数（次）显着增加（缺血组与缺血+H2S组相比为：1.83±0.27vs.3±0.46，P＜0.05）。四组大鼠的平均游泳速度无显着性差别（P＞0.05）。⑶假手术组和H2S组的CA1区锥体细胞形态正常。缺血组海马的CA1区锥体细胞出现明显的核固缩现象，胞浆染色不均，难以分辨正常的胞体形态，细胞周围可见明显水肿，细胞分布散乱不均；缺血+H2S组海马的CA1区锥体细胞也可见核固缩现象，但明显少于缺血组，细胞分布趋于均匀，胞周水肿也明显减少，胞浆染色也较均匀，可见多数锥体细胞的形态趋于正常。⑷对局部场电位的计算神经生物学分析结果表明，缺血会导致CA3与CA1之间的θ节律和γ节律相位同步性显着减弱，给予H2S后，两个脑区减弱的相位同步得到显着恢复。缺血导致CA3-CA1通路θ与γ节律上的信息流单方向指数c2的显着下降，而给予H2S后，这种下降趋势得到恢复。⑸与假手术组相比，缺血组的场兴奋性突触后电位（fEPSPs）斜率百分比显着降低（123.33±2.62vs.112.35±2.52，P＜0.001），在使用外源性H2S处理后，缺血+H2S组大鼠的fEPSPs斜率百分比得到明显提高（缺血+H2S组vs.缺血组：124.99±3.64vs.112.35±2.52，P＜0.001）。⑹GAP-43主要表达于锥体细胞的胞体及其附近，缺血组的GAP-43阳性表达最低，缺血+H2S组的GAP-43阳性表达介于假手术组和缺血组之间。缺血组与假手术组比较，P＜0.001；缺血组与缺血+H2S组比较，P＜0.001。⑺一次性给予低剂量NaHS（5.6mg/kg）可促进荷瘤鼠GBM瘤体的生长，表现为瘤体体积明显增大（P＜0.001），瘤体组织出现空洞，坏死、出血明显增多，新生血管明显增多。⑻肿瘤+H2S组与肿瘤组大鼠脑内H2S的含量均高于假手术组（P＜0.05），肿瘤+H2S组H2S含量比肿瘤组显着提高（P＜0.05）；肿瘤+H2S组大鼠脑内的CD34的阳性表达明显高于肿瘤组（P＜0.001）；肿瘤组和肿瘤+H2S组瘤内的MVD（条/mm2）测定结果分别为41.2±7.9和97.0±10.8,具有极显着性差异，P＜0.001；与肿瘤组相比，肿瘤+H2S组大鼠瘤体内HIF-1α和MMP-2的阳性表达量均显着增多（P＜0.001）。结论⑴外源性H2S可提高缺血大鼠模型海马内H2S的含量；⑵外源性H2S可改善慢性脑缺血大鼠的空间认知障碍，其机制与H2S可改善慢性脑缺血导致的大鼠海马锥体细胞的形态结构异常有关；⑶慢性脑缺血可造成海马内慢γ振荡与θ振荡模态的改变；外源性H2S可使慢性脑缺血导致的θ与γ模态改变得到一定程度的恢复，这有可能是H2S对抗慢性脑缺血认知损伤的一个新的机制；⑷H2S可增强慢性脑缺血时大鼠海马CA1区神经元LTP，这是H2S改善脑缺血导致的大鼠空间认知障碍的神经电生理机制，这种电生理作用与H2S促进脑缺血大鼠海马CA1区GAP-43的表达有关；⑸一次性给予低剂量（5.6mg/kg）的外源性H2S可促进GBM瘤体的血管新生，促进瘤体的生长，其机制与外源性H2S促进瘤体的HIF-1α和MMP-2表达有关；⑹H2S对缺血的海马锥体细胞和缺血的胶质瘤细胞都具有神经保护作用。
李飞[5]（2010）在《亚低温后适应对树鼩局灶性脑缺血VEGF表达及神经元抗凋亡机制的研究》文中研究说明[目的]观察树鼩血栓性脑缺血亚低温后适应对神经元、神经元微环境及其对皮层梗死面积的影响,研究缺血亚低温后适应对脑缺血保护效应,探讨血管内皮生长因子（endothelial vascular growth factor,VEGF）在基因水平、蛋白水平及受体在树鼩脑缺血以及低温后适应中的作用,揭示VEGF的表达调控在脑缺血亚低温后适应中的作用机制。[方法]采用光化学反应诱导树鼩局灶性脑缺血,建立动物模型,在造模后6h采用局部降温的方法,使树鼩脑部温度降至31±0.5℃,并维持1h以建立树鼩局灶性脑缺血亚低温后适应组;使用外源性VEGF抗体分别在脑缺血造模结束后即刻、6h后注入树鼩小脑延髓池,以复制树鼩局灶性脑缺血VEGF抗体注射模型,如同时使用上述两种方法,则可建立脑缺血VEGF注射后亚低温后适应（Hypothermia Post Condition,HPC）模型,分别应用TUNEL（Terminal deoxynucleotidy transferase-mediated uridine5’-triphosphate-biotin nick end labeling,TUNEL）染色法、HE染色、TTC（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride）染色、海马区微透析技术探讨缺血组、缺血后亚低温后适应组、缺血VEGF抗体注射组的缺血VEGF注射后亚低温后适应组各脑区神经细胞死亡改变、皮层梗死面积的变化及海马区神经元微环境的改变;应用RT-PCR（Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction）技术、ELISA（Enzymelinked-immuno-sorbent assay）技术,研究VEGFmRNA、VEGF蛋白质及其受体在脑缺血后亚低温后适应中的变化。[结果]脑缺血后,缺血组与VEGF抗体组、HPC组及联合使用VEGF抗体及HPC组的VEGFmRNA、VEGF蛋白、VEGF受体（VEGFR-1＼VEGFR-2）及海马CA1区、皮层神经细胞坏死与凋亡、海马局部神经元微环境及皮层梗死面积上均有显着性差异。在VEGFmRaNA检测中提示:海马VEGFmRNA含量较皮层高（P＜0.05）,脑缺血后HPC使皮层VEGFmRNA于24h时含量明显增加（P＜0.05）,72h时表达下降,而使用VEGF抗体组VEGFmRNA于72h时明显增加（P＜0.05）;海马VEGFmRNA含量则表现为,HPC组缺血侧mRNA含量24h时低于缺血组（P＜0.05）,并持续至72h;VEGF抗体组能明显减少对侧VEGFmRNA的含量;VEGF在海马及皮层中含量的检测提示:在脑缺血后皮层和海马中,VEGF的含量24h时均明显增加（P＜0.05）,随时间延长有所下降（P＜0.05）,HPC组在缺血后24h时显着增（P＜0.05）,72h时下降与缺血组72h时无差异（P＞0.05）,VEGF抗体组能明显抑制HPC及缺血所致的VEGF含量增加;TTC染色显示:VEGF抗体组皮层梗死面积显着增加（P＜0.05）达80%,HPC可显着降低皮层梗死面积（P＜0.05）达19.67%;海马局部微透析液离子分析提示:缺血后海马局部神经元细胞外液中Na+浓度显着下降（P＜0.05）,K+浓度明显上升（P＜0.05）,Ca2+显着下降（P＜0.05）;HPC在24h有助于抑制上述变化（P＜0.05）,72h使上述变化加剧（P＜0.05）。HE染色提示:脑缺血后海马CA1区神经元坏死数明显增加（P＜0.05）,HPC于24h时可使坏死细胞数显着下降（P＜0.05）,但可增加72h的坏死细胞数,VEGF抗体组则在24h、72h均可增加缺血侧坏死细胞数;缺血同样可以使皮层缺血区神经细胞坏死数显着增加（P＜0.05）,但对侧区除VEGF抗体组,神经细胞坏死仅出现于72h,其中24h时HPC可明显减少皮层神经细胞坏死,但72h可增加神经细胞坏死。TUNEL染色提示:脑缺血后缺血侧海马CA1区神经元凋亡24h时显着增加（P＜0.05）,随时间延长凋亡细胞减少,但HPC组72h时神经元凋亡增加,72h HPC缺血+VEGF抗体组海马神经元凋亡显着低于HPC缺血组（P＜0.05）;皮层神经细胞表现为:HPC可显着减少缺血后24h皮层神经细胞凋亡（P＜0.05）,但随时间延长凋亡细胞数增加（P＜0.05）,而缺血组,皮层神经细胞凋亡数随时间延长逐渐减少（P＜0.05）。ELISA检测VEGFR-1含量结果显示:缺血后VEGFR-1的含量显着升高（P＜0.05）,且缺血侧低于对侧（P＜0.05）;同时,VEGFR-1的含量于24h达高峰,HPC可增加缺血后VEGFR-1的含量。VEGFR-2含量检测结果示:缺血后VEGFR-2含量在脑和海马组织中显着增加（P＜0.05）,并随时间延长持续增加（P＜0.05）,HPC可显着增加VEGFR-2的含量（P＜0.05）。[结论]①树鼩局灶性脑缺血HPC早期具有上调VEGF表达,抑制神经元凋亡和坏死以及减少梗死面积的作用。其机制可能与VEGF通过多条途径维持和改善神经元微环境的脑保护效应有关。②VEGF蛋白与VEGFmRNA的相互关系表明,HPC组缺血早期VEGF表达增强,而HPC后期VEGF表达下降可能是VEGF合成过程中的负反馈调节的结果,以致胞浆内mRaNA转录减少。③抑制VEGF作用可改变脑缺血后HPC的脑保护作用,证实HPC的脑保护作用与VEGF表达上调有关。
刘珂舟[6]（2009）在《脑缺血及再灌注过程中大鼠海马区一氧化氮动态变化的在体研究》文中研究表明缺血性脑损伤是一个复杂的病理生理过程，其主要病理变化是缺血性神经元损伤。以往对缺血性脑损伤的研究认为，脑血流中断后，脑细胞能量供应不足而导致脑细胞死亡。近年来研究发现脑血流中断和再灌注使脑组织细胞产生损伤级联反应，至少涉及4个不同的机制：能量障碍和兴奋性氨基酸毒性、梗死周围去极化、炎症及程序性细胞死亡。大量动物实验及临床研究表明，脑缺血及再灌注期间发生着复杂的病理生理变化。一方面，脑缺血再灌注既可以挽救濒临梗死的细胞，另一方面加重细胞损伤，导致细胞死亡。而在这个复杂的过程中，一氧化氮（Nitric Oxide，NO）起着十分重要的作用。其作为一种新型信使分子，同时具有神经介质和神经毒性作用。尤其在脑部的组织中的双重作用更是近年来研究的重点。一方面它能够增加皮层供血量，缩小梗死面积；另一方面它能够与缺血产生的氧自由基协同造成神经细胞损伤。本论文通过在体检测脑缺血及再灌注过程中大鼠脑海马内NO的释放情况，真实反应了该过程中NO的释放变化情况，为进一步研究NO的神经介质作用和神经毒性作用奠定基础。并以培养的大鼠海马神经细胞的缺氧缺糖（OGD）为离体脑缺血／再灌注模型（即对培养的海马神经细胞进行缺氧缺糖复氧复糖），利用荧光标记和激光共聚焦实时扫描技术，对海马神经细胞内释放的NO变化进行了检测，从而完成了对脑缺血／再灌注过程中NO的动态变化过程的整体与细胞两个层面的研究。最新的关于脑缺血及再灌注损伤的治疗方法的研究是通过对再灌注过程的干预（post-conditioning）来减少脑部梗死面积，但该过程中NO的变化情况、具体的作用机理及究竟哪种干预方法更有效均未见报道。通过使用本论文中的在体检测NO方法，实时、连续地记录了该干预过程中NO的变化情况，从而阐明了NO确实参与了缺血后处理，提示NO通路有可能是该方法对脑缺血／再灌注损伤保护作用的一条途径。同时，利用TTC染色与流式细胞技术对比了不同后处理方法对于大脑的保护作用，为进一步优化该干预方法提供了一定的理论基础。所得结果如下：1．海马内NO释放减少，对血管的舒张作用降低，继而大鼠血压上升。这与理论“内皮依赖性舒张因子（endothelium-derived relaxing factor，EDRF）和一氧化氮同质”相符，进而验证了该在体检测NO技术的真实性和稳定性。同时得出结论，静脉注射一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）抑制剂L-NAME 20μL-30μL后，NO的释放量减少了4．5 nM-6nM。2．大鼠脑缺血／再灌注初期中，海马内NO的变化经历了四个阶段：在脑缺血的最初10min，由于大脑供血的迅速减少，NO的释放量也迅速下降，并达到最低点；之后稳定维持在一个低水平；在再灌注初期，由于血液的恢复，NO释放量迅速升高，并在10．15min内达到最高点；之后维持在一个稳定的高水平。同时通过拟合定标曲线，计算得出：在脑缺血过程中海马内NO释放的减少浓度为0．806±0．221μM，在再灌注初期NO释放量增加浓度为0．768±0．029μM。3．在不同的时间点分别静脉注射内皮型NOS （eNOS）／神经元型NOS（nNOS）和诱生型NOS（iNOS）的抑制剂，结果表明在再灌注初期eNOS／nNOS起主要作用，与iNOS没有关系，在这个过程中海马内释放的NO对受损脑组织起到了保护和损伤双重作用。4．在离体培养的大鼠海马神经元细胞实验上，通过共聚焦显微镜得到了NO在OGD／复氧复糖模型中的变化过程。该过程实验结果与在体大鼠实验结果相比，NO释放的变化过程显得较为简单。在OGD／复氧复糖过程中，NO的表达均有明显上升，并在再灌注10-12 min后达到稳定的平台期。5．利用在体检测NO技术，实验发现缺血后处理（post-conditioning）能够使大鼠海马内NO的释放缓慢增加，从而进一步增加脑内血流量。我们认为，脑缺血后处理所引起的NO缓慢而大量的释放能够抑制NO的毒性作用而进一步加大NO对于脑血流的积极增加作用，从而减少脑缺血／再灌注损伤。不同后处理方法对于脑内NO释放的影响不同。6．对比6组不同的后处理方法（即改变缺血和再灌注的时间长短及交替的次数），实验发现缺血后处理都可以一定程度上减少脑部梗死面积，提高大鼠海马内神经细胞的存活率。但其中3次30s／30s的再灌注／缺血循环能够最有效的减少大脑损伤。我们认为该方法可能能够最大程度的激发脑内NO的缓慢大量释放，说明NO很有可能是post-conditioning改善脑损伤的一条作用途径。本论文采用实时、连续、在体检测NO结合荧光标记与激光共聚焦实时扫描技术的方法，分别从整体与细胞两个层次上对脑缺血／再灌注过程中大鼠海马内NO浓度进行了检测，全面的阐述了该过程中NO的变化情况以及对脑组织的双重作用。另一方面，利用NO的在体检测技术，首次检测了在缺血后处理过程中NO的变化情况，揭示了NO可能是该干预方法作用的一个途径，并通过对比多种缺血后处理方法对于缺血／再灌注损伤的保护作用，进一步对该干预方法进行优化。NO在脑缺血／再灌注疾病中发挥着重要的作用，清楚了解NO在脑缺血／再灌注过程中的变化及其作用机制对于防治中风药物的开发与筛选以及临床上治疗中风引起的神经损伤都具有重要的指导意义。
黄河清[7]（2008）在《西酞普兰对全脑缺血VD大鼠神经发生的影响及5-HT1A受体机制初探》文中提出血管性痴呆（VD）是仅次于阿尔采默病（AD）引起老年期痴呆的常见病因,严重危害老年人生存质量,但迄今还没有治疗VD的有效方法。VD大多由于脑血流量明显减低导致的脑灌注不足所致,对缺血缺氧非常敏感的海马在VD的认知功能障碍的发生发展中起重要作用。由于大量研究证实成年脑内存在具有增殖与分化潜能的神经干细胞（NSCs）,比如海马齿回（DG）和室下区（SVZ）等,尤其是海马NSCs的增殖、分化、迁移和整合因与学习记忆过程密切相关,给治疗VD带来了新的希望。近来研究发现,脑缺血可以激活脑内NSCs增殖、迁移和分化,但是脑缺血后增强的神经发生并不能代偿因缺血而造成的神经元丢失和海马的学习记忆功障碍,所以目前创造合适的微环境,进一步激活自身的NSCs和内源性修复已成为一个重要的研究方向。在这一方面,5-HT和选择性中枢5-HT再摄取抑制剂（SSRIs）类药物倍受关注。此外研究发现,5-HT1A受体不仅在海马含量丰富,而且是5-HT介导神经发生的主要受体。尽管如此,目前仍缺乏有关SSRIs对脑缺血神经发生及认知障碍作用及作用机制的研究。基于上述理由,我们假设:SSRIs类药物西酞普兰（CIT）可促进VD大鼠脑内NSCs增殖及分化,并进而改善大鼠认知功能,而且此过程受到5-HT1A受体功能的调控。本研究可为脑缺血海马神经发生的调控提供重要的实验依据,也可为临床干预脑缺血性认知功能障碍提供新的思路。研究目标:1.阐明VD大鼠脑内神经干细胞增殖的时空关系;2.明确CIT对脑内不同部位NSCs增殖和分化的作用及其对大鼠认知功能的影响;3.初步阐明CIT促脑缺血神经发生及影响认知功能的机制:5-HT及5-HT1A受体的作用探讨。研究方法:1.动物分组及处置:Wistar大鼠（n=336）随机分为正常正常对照组（NC）、假手术对照组（SC）、血管性痴呆组（VD）、西酞普兰干预的血管性痴呆组（VD-C）以及西酞普兰和WAY100635联合干预组（VD-CW）,后四组按手术后时相点每组分术后1、3、7、14、21、42d组。CIT 20mg/kg、WAY100635 0.3mg/kg腹腔注射,1次/d,21天后造模,造模后持续给药至相应时相点。BrdU 50mg/kg腹腔注射,每天1次,第7次注射后12h处死动物用于NSCs增殖的研究;对各实验组术后14d亚组,每天1次,第7次注射后28d处死大鼠用于NSCs分化的研究。采用改良的Pulsinelli’s四血管阻断法制作VD动物模型2.动物认知功能检测:Morris水迷宫定位航行实验和空间搜索实验检测平均逃逸潜伏期（EL）、平台象限游泳距离百分比（DP）和穿越平台次数反映大鼠空间学习和记忆功能;大鼠电生理检测类P3波潜伏期（类P3L）。3. NSCs增殖的观察:采用免疫组织化学方法, 35μm新鲜冰冻切片0.3%TritonX-100和2N HCl处理后,SABC法Cy3免疫荧光或DAB显色后,显微镜下观察拍照。4. NSCs分化的观察:采用BrdU免疫荧光双标记的方法,BrdU免疫荧光标记后,分别加GFAP或Tuj-1或Calbindin-D28k抗体,各自标记星形胶质细胞、幼稚和成熟神经元及成熟神经元,另一荧光显色系统显色后,倒置荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察拍照。5.尼氏染色检测海马CA1神经元存活情况。6. 5-HT1A受体表达测定:采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）法,上游引物5’–GCCCCCCAAGAAGAGCCTGA–3’,下游引物5’–GCCATCTTGCGCTTTGCTTC– 3’。内参照物GAPDH上游引物:5’–ACCACAGTCCATGCCATCAC–3’,下游引物5’–TCCACCACCCTGTTGCTGTA–3’。先后进行总RNA提取,逆转录反应及实时荧光定量PCR扩增。以相对表达丰度反映5-HT1A受体mRNA表达。7.高效液相色谱（HPLC）检测海马和皮层神经递质的含量。8.细胞计数及统计学处理:形态学研究组织切片均在同一放大倍数下分析（免疫组织和免疫荧光化学200×,组织化学400×）,应用IPP 6.0图像分析软件进行分析。所有数据资料均以均数±标准差（ˉx±s）表示,采用SPSS 11.0统计软件进行分析。实验结果1.各实验组大鼠脑内NSCs增殖的时空分布: NC组大鼠脑内海马DG和SVZ区BrdU阳性细胞分布最显着,在皮层也有少量表达。大鼠海马DG细胞增殖从全脑缺血后3d开始明显增加,术后14d达高峰（BrdU阳性细胞数约为缺血前的3倍）。VD-C组各时相点海马DG细胞增殖数量从术后3d开始约为VD组的2倍。但VD-CW组DG细胞增殖受到显着抑制,且较VD组和VD-C组细胞增殖明显减少,其差别有统计学意义。NC及SC组大鼠CA1区、CA2和CA3区均未见BrdU阳性细胞,脑缺血后海马CA1和CA2区增殖细胞出现时间较晚,缺血后7d才有BrdU阳性表达,且数量较少。加用CIT后可使CA1区细胞增殖增加约1倍,CA2区细胞增殖提前到缺血3d开始出现且较高表达持续到术后21d。但联合应用WAY 100635后逆转了CIT增强的CA1和CA2区的细胞增殖。VD组术后3d SVZ神经发生开始显着增强,加用CIT后神经发生的明显增强提前到术后1d。术后7d BrdU阳性表达至峰值（与术后3d组比较P<0.01）,此后迅速下降（术后14d与7d比较差异显着,P<0.01）,14d后下降趋势减缓。VD-C组各时相点BrdU表达情况与VD组比较无显着差异,而VD-CW组各时相点神经发生与VD-C组比较无显着差异。缺血后各实验组PCg和Str18区BrdU阳性表达增加。VD组术后13d皮层ⅡⅥ层大脑皮质BrdU阳性表达开始增加,术后7d BrdU阳性表达较缺血3d明显增加（P<0.01）,缺血14d增加更为显着（P<0.01）,缺血21d BrdU阳性表达显着减少。VD-C组术后各时相点的皮层BrdU阳性表达较VD组明显增加（P<0.01）,术后14d尤其显着。VD-CW组缺血各时相点BrdU阳性细胞数较VD组明显增加,但与VD-C组比较无显着差异。2.各实验组大鼠脑内NSCs存活分化的情况:脑缺血再灌注各实验组均可见双标记阳性细胞。①在海马DG,VD组新生细胞存活率较SC组显着下降,但双标记阳性细胞比率较SC组显着增高（P<0.05）,其BrdU阳性细胞主要分化为Tuj-1阳性的不成熟神经元;CA1区BrdU阳性细胞主要表达Tuj-1和Calbindin-D28k标志物;BrdU/GFAP双标记阳性细胞散在分布于齿回GCL和海马门区。VD-C组新生细胞存活率成神经分化的比例增加,其海马DG和CA1区分化为Calbindin-D28k阳性成熟神经元的比例较VD组增加,但BrdU/GFAP双标记阳性率无明显改变。在VD-CW组则发现新生细胞存活和分化的比例显着降低,少见BrdU/Calbindin-D28k双标记阳性细胞。②皮层BrdU阳性细胞出现在PCg区、Str18区、PAC区等部位,以PCg区BrdU阳性表达最稳定。VD组BrdU阳性细胞存活率较SC组降低,但无统计学差异;VD-C组新生细胞存活率较VD组明显增高（P<0.05）。NS和SC组未发现双标记阳性细胞,VD组可见少量BrdU/Tuj-1和BrdU/Calbindin-D28k双阳性表达,较多BrdU阳性细胞表达GFAP。VD-C组BrdU/Tuj-1双阳性率与VD组比较无显着差异,但BrdU/Calbindin-D28k双阳性表达百分率较VD组显着升高（P<0.01）,且细胞突起较长。虽然VD-CW组各项指标均较VD-C组降低,但差异无显着性。3.海马5-HT1AR mRNA RT-PCR测定结果:术后1d,各组5-HT1AR mRNA表达显着下调（P<0.01）,术后3d开始回升,VD组海马5-HT1A受体mRNA表达在术后14d达到其峰值。和VD组比较,VD-C组除术后1d组外其余各组大鼠海马5-HT1A受体mRNA表达到丰度均显着升高（P <0.01）,其表达峰值提前至术后7天,且一直到术后21d仍维持在相对较高水平。在CIT联合应用WAY100635的VD-CW组,5-HT1A受体mRNA的表达丰度从术后3d开始仍较VD组高,其中术后3d和7d亚组与VD组有显着差异;但VD-CW组术后各时相点5-HT1A受体mRNA的表达丰度均较VD-C组显着降低。4.皮层和海马单胺类神经递质5-HT、DA和NE的HPLC检测结果在海马:大鼠全脑缺血再灌注后7d 5-HT、DA和NE水平均降低,但其中NE水平的下降无统计学意义。VD组到术后21d海马单胺类神经递质水平接近正常。VD-C组大鼠海马5-HT水平升高近1倍（P <0.01）,DA和NE水平无明显变化。VD-CW组5-HT水平虽较VD-C组有升高但无显着差异,DA和NE水平亦无显着变化。在皮层:大鼠全脑缺血再灌注后7d 5-HT水平下降,但DA和NE水平无明显变化,术后21d时均接近正常水平。VD-C组5-HT和NE水平与VD组比较无显着变化,但DA水平则较VD组明显升高（P <0.05）。VD-CW组皮层5-HT水平上升明显（约为SC的3倍）,皮层DA水平较VD-C组明显下降（P <0.01）,而NE水平无明显变化。5.海马CA1区神经元存活情况:各实验组大鼠海马CA1区神经元均较SC组显着减少,且均在术后7d程度最严重,此后海马CA1区神经元数量开始逐渐恢复。其中,VD-C组恢复的趋势较VD组明显,而VD-CW组的恢复趋势最为缓慢。各实验组海马CA1区神经元减少的程度不同:和VD组比较,VD-C组术后各时相点CA1区神经元均较多,且差异显着（P <0.01）;而VD-CW组的CA1区神经元数量却较少,除了7d和14d组差异显着性在P <0.05外,其余各时相点的差异均非常显着（P <0.01）。6.大鼠Moris水迷宫行为学检测结果:VD、VD-C和VD-CW组大鼠定位航行实验平均逃逸潜伏期（EL）在造模后均较NC及SC组显着延长（P<0.01）,其后随时间推移逐渐缩短;但VD-C组EL延长程度较VD组减轻,且组术后14d、21d和42d的EL延长较VD组显着减少（P<0.05）;相反,VD-CW组EL较VD组各14d、21d、42d亚组EL均显着延长。VD、VD-C和VD-CW组大鼠空间搜索实验平台象限游泳距离百分比（DP）造模后均显着降低,但随时间推移逐渐上升;VD-C组DP均较VD组高（P <0.05）,到术后42d已经与SC组物显着差异;相反,VD-CW组造模后各时相点DP均较VD组相应时相点明显减低（7d组P<0.05,14d、21d、42d亚组P<0.01）。大鼠穿越目标区的次数与DP的变化具有相同的趋势。7.事件相关电位类P3检测结果:各实验组除VD-C组术后42d亚组外,各时相点类P3L均较SC组显着延长。各实验组大鼠术后3d与术后1d亚组比较类P3L显着延长,术后7d类P3L进一步延长,其延长的程度在VD组和VD-C组无统计学意义,但在VD-CW组则显着延长。此后类P3L延长的程度随时间延长逐渐减轻,但减轻的程度不同:VD组和VD-CW组到术后42d类P3L才显着缩短;而在VD-C组,术后21d即较14d明显改善,术后42d的P3L较21d显着缩短且与SC组比较已经无显着差异。研究结论:1.全脑缺血再灌注可诱导成年大鼠脑内神经发生增强,以海马DG和SVZ区新生神经细胞的增殖最明显,海马CA1、CA2区和PCg皮层也发现脑缺血后神经发生增强的现象。海马和皮层增强的神经发生在术后14d达高峰,21d开始下降,一直可持续到术后42d;而SVZ神经发生的高峰出现在术后7d。大鼠脑缺血再灌注后水迷宫和类P3认知功能的改变,与海马及皮层BrdU阳性细胞的增殖没有相关性。2. CIT可显着促进VD大鼠海马DG、CA1、CA2区和皮层的BrdU阳性细胞增殖,对SVZ区的新生神经细胞增殖无明显影响。同时,CIT可显着促进海马DG、CA1区和皮层新生神经细胞的成神经元分化,并且该作用与CIT改善VD大鼠认知障碍的效应关系密切。CIT的上述作用可被联合应用WAY100635所逆转。3. CIT促进VD大鼠脑内神经发生的机制,可能与其提高中枢突触间隙5-HT水平、增加海马5-HT1A受体mRNA表达有关;而其改善动物认知障碍的作用,在术后21d内可能与其调节海马及皮层单胺类神经递质水平、保护海马CA1区神经元有关,在术后42d则可能是通过促进海马和皮层新生神经细胞的成神经元分化及神经保护作用实现的。
陶冶[8]（2008）在《急性脑缺血再灌注皮层单胺类神经递质动态变化及中药干预作用》文中提出单胺类神经递质是急性脑缺血再灌注损伤的重要因素,通过多种途径促进自由基的产生、兴奋性氨基酸的释放、细胞内钙超载、发挥强烈缩血管作用,引发一系列脑缺血再灌注病理生理效应,终致细胞坏死和凋亡。本实验通过建立高效液相色谱检测方法,动态观察急性脑缺血再灌注损伤中单胺类神经递质的含量变化,选用活血化瘀通络药—心脑舒通胶囊对急性脑缺血再灌注损伤进行干预,观察其对单胺类神经递质指标的影响,探讨其对急性脑缺血再灌注脑损伤的保护作用和机理。目的:动态观察急性脑缺血再灌注损伤大脑皮层病理形态学改变和单胺类神经递质含量的变化,建立单胺类神经递质动态表达曲线;探讨活血化瘀通络中药—心脑舒通胶囊对脑缺血损伤的保护作用及机理。方法:1.建立高效液相色谱检测方法。采用线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞建立急性局灶性脑缺血再灌注模型。随机分为:假手术组,脑缺血1.5h再灌注45min、1h、3h、6h、12h、24h、72h组,共8组。HE染色观察大脑皮层病理形态学变化,高效液相色谱法检测缺血侧大脑皮层去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、高香草酸、5-羟色胺含量变化。2.采用线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞建立急性局灶性脑缺血再灌注模型。随机分为:假手术组,脑缺血1.5h再灌注24h组,心脑舒通胶囊治疗组。HE染色观察大脑皮层病理形态学变化,高效液相色谱法检测缺血侧大脑皮层去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、高香草酸、5-羟色胺含量的变化。结果:1.建立的高效液相色谱检测方法快速、灵敏、分离效果好,5种物质同时分离,其测定时间约20分钟,精密度1.2%-10.0%,回收率90.0%-110.0%。2.大鼠脑缺血1.5h再灌注3h,缺血侧皮层HE染色出现组织损伤,随着再灌注时间延长,损伤逐渐加重,至再灌注72h神经细胞形态较前有所好转,肿胀减轻。3.单胺类神经递质的含量随着急性脑缺血再灌注不同时间而呈现不同变化。肾上腺素含量随再灌注时间延长呈现先升高后降低的趋势,再灌注6h其含量升高达至高峰;5-羟色胺和高香草酸含量随再灌注时间延长呈现上升趋势,再灌注6h5-羟色胺含量最高,再灌注45min时高香草酸含量最高;再灌注24h、72h,5-羟色胺和高香草酸含量仍明显升高。4.心脑舒通胶囊可减轻细胞损伤,降低异常升高的单胺类神经递质肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺含量,显着升高多巴胺/高香草酸比值。结论:大鼠急性脑缺血再灌注过程中存在脑组织病理形态学改变,在此动态过程中出现单胺类神经递质代谢紊乱。活血化瘀通络中药—心脑舒通胶囊能够减轻大脑皮层病理形态学损伤,其机制可能与调节单胺类神经递质的紊乱有关。
朱肖菊[9]（2008）在《电项针对脑缺血再灌注大鼠脑保护作用的实验研究》文中提出中风是常见病、多发病,病死率、致残率极高,而缺血性中风约占75%,且有逐年增加的趋势。随着溶栓疗法的应用,再灌注损伤的问题越来越受到重视。研究表明,脑缺血再灌注损伤（CIR）与神经细胞凋亡、炎症反应、钙超载、氧自由基的产生、兴奋性氨基酸的毒性作用等密切相关。因此预防和治疗缺血性中风,降低它的发病率和致残率,已成为当前迫切需要解决的问题。本课题通过研究电项针对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用及其作用机理,为缺血性脑血管病的病理生理机制的研究和治疗方法的选择提供实验依据。目的:观察大鼠CIR后缺血半暗区ICAM-1和凋亡相关基因表达的变化规律及电项针对其的影响,探讨电项针治疗脑梗死可能的作用机制。方法:采用栓线法制备局灶性脑缺血动物模型,将Wistar大鼠随机分为假手术组（A）、模型组（B）、电体针组（C）及电项针组（D）,各组随机分成12h、1d、3d、5d四个时间段,对大鼠进行实验观察。（1）参照Zea-Longa的5级评分标准对其神经功能障碍进行评分;（2）通过HE染色观察病理形态学变化;（3）电镜观察脑组织超微结构的变化:（4）通过TUNEL法检测细胞凋亡;（5）应用免疫组织化学方法检测缺血半暗区Bcl-2、Fas-1、ICAM-1的蛋白表达;（6）应用原位杂交技术检测缺血半暗区Fas-1 mRNA和ICAM-1 mRNA的表达。结果:（1）模型组脑缺血再灌注后出现明显神经功能缺损,与假手术组比较差异显着（P＜0.01）,证明脑缺血再灌注损伤实验模型成功;电体针组、电项针组与模型组比较差异显着（p＜0.01,p＜0.05）;电项针组与电体针组比较亦有显着性差异（p＜0.05）。说明电项针对神经功能缺损的恢复有明显的促进作用。（2）HE染色显示:与模型组比较电体针组和电项针组缺血半暗区神经细胞肿胀减轻,胶质细胞增生,神经元数量和新生毛细血管增多;电项针组较电体针组明显。（3）电镜观察显示:与模型组比较电体针组和电项针组神经细胞超微结构的变化明显改善,电项针组优于电体针组。（4）电体针组和电项针组均有很好地抑制细胞凋亡的作用,与模型组比较均有显着性差异（p＜0.05,p＜0.01）;电体针组与电项针组3d和5d时比较有显着性差异（p＜0.05）。可见,电项针组抑制细胞凋亡作用最优。（5）电体针组和电项针组与模型组比较,可明显提高Bcl-2蛋白表达水平,并在早期抑制Fas-1蛋白及其mRNA的表达、ICAM-1蛋白及其mRNA的表达（p＜0.05,p＜0.01）。同时间点电项针组与电体针组比较有显着性差异（p＜0.05）。结论:（1）电项针可有效促进脑缺血再灌注大鼠神经功能的恢复。（2）电项针可促进缺血半暗带区胶质细胞和毛细血管增生,减轻神经元损伤,改善神经细胞的超微结构。（3）电项针有较好地抑制细胞凋亡的作用,可促进Bcl-2蛋白表达,抑制Fas-1蛋白及其mRNA的表达,表明其抑制神经细胞凋亡的作用与调控Bcl-2蛋白和Fas-1蛋白及其mRNA的表达有关。（4）电项针可能通过下调脑缺血区粘附分子ICAM-1蛋白及其mRNA的表达而防治脑缺血再灌注炎性损伤,发挥神经元保护作用。（5）通过对照研究发现电项针治疗在以上几方面均优于电体针组,说明电项针疗法是治疗脑缺血的有效方法。
任周新[10]（2008）在《三七总皂苷合黄芪总皂苷对实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究》文中研究说明缺血性脑血管病已经成为威胁人类生命健康的一种主要疾病，尽管在梗死后的再通方面已经取得了一定的进展，但是在缺血后再灌注的干预上，效果较差。在进一步深入探索脑缺血再灌注损伤的特点、规律和发生机制时，发现脑缺血再灌注损伤的病理过程复杂，学者们倾向于联合应用针对多种机制的药物进行治疗，并初步证实“鸡尾酒”疗法（联合治疗）是可行的。益气活血法由益气药和活血药组成，多年来作为中风病主要治法之一而得到广泛应用。近年来，具有活血化瘀作用的三七总皂苷注射液（商品名：血栓通或血塞通），应用于急性中风的治疗，取得了一定的疗效。近期，临床报道血栓通或血塞通注射液和黄芪注射液联用，具有一定的协同作用。根据文献的检索，经过分析认为，其中的三七总皂苷和黄芪总皂苷是其作用的有效部位，两者合用可能产生协同作用。因此，首先，通过对不同型号的大孔树脂、洗脱液的浓度、洗脱溶媒量的筛选实验，经过纯化验证和HPLC图谱分析，确立生产工艺路线，制备可靠的实验用药物。然后，以局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑梗死百分率和脑缺血再灌注小鼠的脑水肿为指标，应用均匀设计、2x2析因设计，进行实验分组、结果分析。结果发现：模型大鼠出现了明显的脑梗死，模型小鼠脑组织含水量明显升高。三七总皂苷和黄芪总皂苷合用（PNS-TSA）后能降低模型大鼠脑梗死百分率，能降低模型小鼠脑含水量，表现出相加的协同作用；并得到了优化剂量。以该剂量为基础，开展了以下研究：PNS-TSA对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。采用CCAO大鼠模型，干湿重法观察PNS-TSA对脑组织含水量的影响；静脉注射伊文思兰，观察PNS-TSA对脑血管通透性的影响。采用线拴法MCAO大鼠模型，观察PNS-TSA对脑梗死百分率、脑组织病理形态学的影响。结果表明：PNS-TSA能显着降低模型大鼠脑微血管的通透性和脑含水量，改善脑水肿；明显减小脑梗死百分率，改善脑组织病理性损伤，对大鼠脑缺血再灌注损伤显示出保护作用。PNS-TSA对CCAO小鼠脑组织抗氧化作用的影响。采用CCAO小鼠模型，以T-SOD、MDA、NOS、GSH、GSHopX、T-AOC、CAT、H2O2为指标，观察PNS-TSA对缺血再灌注脑组织抗氧化作用的影响。结果表明，PNS-TSA具有抗氧化损伤的作用，这种作用主要和提高病理状态下的SOD、CAT活力有关。PNS-TSA对MCAO大鼠脑组织中性粒细胞浸润、COX-2活性及相关因子的影响。采用线拴法MCAO大鼠模型，ELISA法检测脑组织中ICAM-1含量、CINC含量、MMP-9含量、PGE2含量、TNF-α含量、IL-1β含量；比色法检测脑组织中MPO活性、COX-2含量；RT-PCR法半定量IL-6mRNA；原位分子杂交法半定量COX-2mRNA。结果显示：PNS-TSA对CINC、TNF-α、IL-1β、ICAM-1、MPO、COX-2、PGE2的活性或含量和IL-6mRNA、COX-2mRNA表达，具有显着的抑制作用，对MMP-9含量未见显着变化。PNS-TSA对MCAO大鼠p-IκBα、IκBα表达、NF-κBp65表达和核转位的影响。采用线拴法MCAO大鼠模型，Western blot法检测p-IκBα、IκBα蛋白表达；免疫组化法检测NF-κBp65表达和核转位。结果显示：PNS-TSA组与模型组比较，缺血区皮层和尾壳核区，NF-κBp65阳性表达面积和累积光密度值显着减少，脑组织中p-IκBα蛋白表达量显着减少，IκBα蛋白表达量显着增加。综合实验结果，认为：PNS-TSA抑制脑组织损伤的作用和其抑制该过程中的炎症反应和抗氧化有关。通过抑制TNF-α、IL-1β、ICAM-1、CINC的表达，抑制中性粒细胞与血管内皮的黏附、聚集，降低中性粒细胞的趋化运动，减弱中性粒细胞在缺血脑组织的浸润和活化：通过抑制IκB-α的降解，减少NF-κB的核转位，抑制COX-2、IL-6的转录，降低COX-2的活性和前列腺素的生成，最终减轻了脑组织的损伤。提示：PNS-TSA可能通过抑制IκB-α的降解，减少NF-κB的核转位，阻碍其效应基因如COX-2、IL-6等的转录和表达，抑制炎症级联反应。实验结果表明：与模型组比较，PNS组IκBα蛋白表达量显着增加，p-IκBα蛋白表达量显着减少，NF-κB核易位明显减弱，其免疫反应阳性表达物多在胞浆与核中共存，阳性面积和积分光密度明显降低，实验结果均为首次发现，有助于揭示PNS抑制脑缺血再灌注损伤的药理作用机制。与PNS组（80mg／kg）比较，同PNS剂量的PNS-TSA（112mg／kg）组缺血脑组织中的IL-1β含量、MPO活性显着降低；除上述指标外，优化剂量PNS-TSA（56mg／kg）组与PNS组比较，缺血脑组织中NF-κB阳性面积和积分光密度、TNF-α含量、COX-2、COX-2mRNA的表达均显着降低。上述结果提示：PNS合用TSA，抑制缺血脑组织中性粒细胞浸润、炎性因子表达和NF-κB活化的作用增强；应用TSA后，可以减少PNS的用量，又达到增效的效果。本研究的创新点：首次对三七总皂苷和黄芪总皂苷抗实验性脑缺血再灌注损伤进行了优化剂量筛选，得到了优化剂量，证实两者的合用具有协同作用。首次发现，PNS-TSA抑制IκB-α的降解，减少NF-κB的核转位，阻碍COX-2、IL-6等的转录和表达。提示：PNS-TSA抑制炎症级联反应的机制和NF-κB的信号转导有关。上述发现，未见国内外的相关报道。PNS合用TSA，抑制缺血脑组织中性粒细胞浸润、炎性因子表达和NF-κB活化的作用增强；应用TSA后，可以减少PNS的用量，又达到增效的效果。
二、沙土鼠全脑缺血再灌流时不同脑区聚胺代谢变化的动态观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、沙土鼠全脑缺血再灌流时不同脑区聚胺代谢变化的动态观察（论文提纲范文）
（1）ERK通路介导的高尔基体应激在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 缺血再灌注损伤对高尔基体形态的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 离体细胞模型:ERK通路在缺血再灌注损伤中激活及其对GRASP65表达的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 在体动物模型:ERK通路在缺血再灌注损伤中激活及其对GRASP65表达的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 缩略词简表 |
| 致谢 |
（2）丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 实验材料与实验方法 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验动物 |
| (二) 药品与试剂 |
| (三) 主要仪器 |
| 二、实验方法 |
| (一) 大脑中动脉栓塞模型的建立 |
| (二) 神经功能评分 |
| (三) 脑组织中IL-1β和TNF-a的含量检测 |
| (四) 梗死体积的评价 |
| (五) PET扫描和图像的分析 |
| (六) 免疫组化学评价 |
| (七) 统计分析 |
| 第二章 实验结果 |
| 一、丹红注射液对神经功能缺损症状的影响 |
| 二、丹红注射液对梗死体积的影响 |
| 三、丹红注射液对TNF-α和IL-1β含量的影响 |
| 四、丹红注射液对葡萄糖代谢的影响 |
| 五、免疫组化分析 |
| 第三章 分析与讨论 |
| 一、丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤疗效的科学评价 |
| 二、丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤机制的探究 |
| (一) 抑制炎症 |
| (二) 微血管重塑,神经元再生,星形胶质细胞活化 |
| (三) 葡萄糖利用率的恢复 |
| 三、本研究存在的局限性 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间发表的文章 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
（3）黄蒲通窍胶囊对全脑缺血再灌注大鼠认知行为及神经再生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表(ABBREVIATION) |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要实验药物、试剂和实验仪器 |
| 2.2.1 实验药物 |
| 2.2.2 主要实验试剂 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物筛选及分组 |
| 2.3.2 模型制备方法 |
| 2.3.3 造模成功的鉴定标准 |
| 2.3.4 实验所用药物的处理 |
| 2.3.5 大鼠神经行为学检测 |
| 2.3.6 BrdU 掺入法结合免疫组织化学法观察神经再生 |
| 2.3.7 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 黄蒲通窍胶囊对脑缺血再灌注造成的神经功能缺损评分(NSS)的影响 |
| 3.3 旷场行为实验(Open-field) |
| 3.4 黄蒲通窍胶囊对缺血造成的记忆损伤有保护作用 |
| 3.4.1 隐藏平台实验 |
| 3.4.2 空间探索实验 |
| 3.5 黄蒲通窍胶囊对全脑缺血再灌注大鼠海马 DG 区神经细胞增殖和新生细胞存活的影响 |
| 3.6 黄蒲通窍胶囊对脑缺血再灌注大鼠海马 DG 区新生细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 现代医学对 ICVD 的认识 |
| 4.1.1 ICVD 的分类 |
| 4.1.2 ICVD 发病的危险因素 |
| 4.1.3 ICVD 发病原因 |
| 4.1.4 脑缺血再灌注损伤发生机制 |
| 4.1.5 ICVD 的药物治疗 |
| 4.2 中医学对 ICVD 的认识 |
| 4.2.1 中医学对脑的认识 |
| 4.2.2 病因病机 |
| 4.2.3 辨证论治 |
| 4.2.4 中药治疗 ICVD 的机制 |
| 4.3 脑区中与学习记忆相关区域 |
| 4.4 脑缺血后诱发学习和记忆障碍 |
| 4.5 缺血性脑损伤与神经干细胞的再生 |
| 4.6 本研究黄蒲通窍胶囊的组方依据 |
| 4.7 本研究相关全脑缺血再灌注的动物模型分析 |
| 4.7.1 四血管闭塞模型 |
| 4.7.2 沙土鼠全脑缺血模型 |
| 4.7.3 双侧血管闭塞合并低血压模型 |
| 4.7.4 三动脉阻断全脑缺血模型 |
| 4.7.5 心脏骤停致全脑缺血模型 |
| 4.8 结果分析 |
| 5 结论 |
| 6 本研究存在的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）H2S对大鼠缺血性神经损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 本文主要缩略语表 |
| 第一章 引言 |
| 第一节 研究背景 |
| 1.1.1 H_2S 在神经系统的功能研究进展 |
| 1.1.1.1 气体信号分子 |
| 1.1.1.2 内源性 H_2S 的生成、代谢及其调节 |
| 1.1.1.3 H_2S 在神经系统的生理及病理生理作用 |
| 1.1.2 脑缺血/缺氧对海马功能的影响 |
| 1.1.3 H_2S 与脑缺血/缺氧 |
| 第二节 研究目的、意义和内容 |
| 1.2.1 研究目的 |
| 1.2.2 研究意义 |
| 1.2.3 主要内容与方法 |
| 第三节 本论文的结构安排 |
| 第二章 H_2S 对慢性脑缺血大鼠空间认知功能的影响 |
| 第一节 前言 |
| 2.1.1 海马与学习记忆功能 |
| 2.1.2 脑缺血对海马功能的影响 |
| 2.1.3 H_2S 改善脑缺血后功能 |
| 第二节 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.1.1 实验动物 |
| 2.2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2.1.3 主要试剂配方 |
| 2.2.1.4 主要实验仪器 |
| 2.2.1.5 计算机软件 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 动物分组及处理 |
| 2.2.2.2 大鼠慢性脑缺血模型（2VO）制备 |
| 2.2.2.3 MWM 测试及数据处理 |
| 2.2.2.4 大鼠灌流取脑 |
| 2.2.2.5 大鼠脑冰冻切片制备 |
| 2.2.2.6 脑片 HE 染色及结果判断 |
| 2.2.2.7 海马 H_2S 含量测定 |
| 2.2.2.8 数据处理及统计分析 |
| 第三节 结果 |
| 2.3.1 实验大鼠情况 |
| 2.3.2 H_2S 对慢性脑缺血大鼠的空间认知障碍的影响 |
| 2.3.2.1 MWM 定位巡航训练结果 |
| 2.3.2.2 MWM 空间探索测试结果 |
| 2.3.2.3 大鼠海马 CA1 区细胞形态学改变 |
| 2.3.2.4 大鼠海马内 H_2S 含量变化 |
| 第四节 讨论 |
| 2.4.1 实验中的动物分组及给药依据 |
| 2.4.2 外源性 H_2S 对慢性脑缺血大鼠空间认知的影响 |
| 2.4.3 慢性脑缺血对大鼠海马内 H_2S 含量的影响及其机制 |
| 2.4.4 外源性 H_2S 的神经保护作用与其应用浓度有关 |
| 第五节 小结 |
| 第三章 H_2S 对慢性脑缺血大鼠海马电生理功能的影响 |
| 第一节 前言 |
| 3.1.1 海马的结构及功能 |
| 3.1.2 海马锥体细胞的突触可塑性 |
| 3.1.3 海马的神经振荡 |
| 3.1.4 神经振荡与学习记忆功能 |
| 3.1.5 脑缺血对海马神经元活动的影响 |
| 3.1.6 H_2S 与神经振荡 |
| 第二节 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.1.1 实验动物 |
| 3.2.1.2 主要实验试剂 |
| 3.2.1.3 主要试剂配方 |
| 3.2.1.4 主要实验仪器 |
| 3.2.1.5 计算机软件 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.2.1 动物分组及处理 |
| 3.2.2.2 大鼠慢性脑缺血模型（2VO）制备 |
| 3.2.2.3 海马 CA3-CA1 电生理记录 |
| 3.2.2.4 大鼠灌流取脑 |
| 3.2.2.5 大鼠脑冰冻切片制备 |
| 3.2.2.6 免疫组化染色及结果判断 |
| 3.2.2.7 海马内电极定位观察 |
| 3.2.2.8 LTP 数据分析 |
| 3.2.2.9 LFPs 数据分析指标及参数 |
| 3.2.2.10 PLV 计算 |
| 3.2.2.11 NIF 计算 |
| 3.2.2.12 数据处理及统计分析 |
| 第三节 结果 |
| 3.3.1 H_2S 对慢性脑缺血大鼠海马 CA1 区神经元突触可塑性的影响 |
| 3.3.1.1 电极定位 |
| 3.3.1.2 海马 CA1 区神经元突触可塑性的变化 |
| 3.3.2 海马 CA1 区生长相关蛋白（GAP-43）的表达 |
| 3.3.3 PLV 结果 |
| 3.3.4 NIF 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 3.4.1 H_2S 对慢性脑缺血大鼠海马 CA1 区神经元突触可塑性的影响 |
| 3.4.2 H_2S 影响脑缺血后的神经振荡 |
| 第五节 小结 |
| 第四章 H_2S 促进大鼠恶性胶质瘤的血管新生 |
| 第一节 前言 |
| 4.1.1 血管新生与肿瘤 |
| 4.1.2 神经胶质瘤及其动物模型 |
| 4.1.3 H_2S 与血管新生 |
| 第二节 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.1.1 实验动物 |
| 4.2.1.2 实验用细胞系 |
| 4.2.1.3 主要实验试剂 |
| 4.2.1.4 主要实验液体配方 |
| 4.2.1.5 主要实验仪器 |
| 4.2.1.6 计算机软件 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2.2 动物分组及处理 |
| 4.2.2.3 C6 胶质瘤大鼠模型制备 |
| 4.2.2.4 大鼠灌流取脑 |
| 4.2.2.5 大鼠脑冰冻切片制备 |
| 4.2.2.6 脑片 HE 染色及结果判断 |
| 4.2.2.7 肿瘤体积的测定 |
| 4.2.2.8 免疫组化染色及结果判断 |
| 4.2.2.9 肿瘤微血管密度的测定 |
| 4.2.2.10 脑组织 H_2S 含量测定 |
| 4.2.2.11 数据处理及统计分析 |
| 第三节 结果 |
| 4.3.1 荷瘤鼠一般表现 |
| 4.3.2 大鼠脑内 H_2S 的含量 |
| 4.3.2.1 H_2S 标准曲线 |
| 4.3.2.2 脑内 H_2S 含量 |
| 4.3.3 HE 染色结果 |
| 4.3.4 脑内胶质瘤体积测定 |
| 4.3.5 免疫组化阴性对照结果 |
| 4.3.6 CD34 表达及瘤内微血管密度测定 |
| 4.3.6.1 CD34 的表达 |
| 4.3.6.2 MVD 测定结果 |
| 4.3.7 HIF-1α的表达 |
| 4.3.8 MMP-2 的表达 |
| 第四节 讨论 |
| 4.4.1 选择 GBM 作为研究对象的原因以及 NaHS 的给药依据 |
| 4.4.2 外源性 H_2S 促进脑内 GBM 的生长 |
| 4.4.3 脑内 H_2S 含量与 GBM 的发育侵袭有关 |
| 4.4.4 H_2S 促进 GBM 的血管新生 |
| 4.4.5 H_2S 促进 GBM 内 HIF-1α的表达 |
| 4.4.6 H_2S 促进 GBM 内 MMP-2 的表达 |
| 第五节 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 第一节 主要结论 |
| 第二节 主要创新点 |
| 第三节 研究前景展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 气体信号分子 H_2S 的神经保护作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 海马结构γ振荡的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在学期间发表论文 |
（5）亚低温后适应对树鼩局灶性脑缺血VEGF表达及神经元抗凋亡机制的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略语 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 亚低温后适应对树鼩局灶性脑缺血不同脑区VEGF表达及神经元凋亡的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 亚低温后适应对树鼩局灶脑缺血VEGF、VEGFmRNA表达的调控及其抗凋亡机制的探讨 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附表1 脑缺血后海马透析液离子及PH值之间的相互关系 |
| 附表2 脑缺血后VEGF及其受体含量之间相关关系 |
| 第三部分 综述:低温后适应与缺血脑保护 |
| 已刊用文章目录 |
| 致谢 |
（6）脑缺血及再灌注过程中大鼠海马区一氧化氮动态变化的在体研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 脑缺血的病理及研究概况 |
| 1.1.1 脑供血的生理特点与脑缺血的关系 |
| 1.1.2 脑缺血/再灌注的损伤机制 |
| 1.1.3 脑缺血/再灌注模型的建立与研究方法 |
| 1.2 一氧化氮与脑缺血 |
| 1.2.1 一氧化氮的病理生理作用 |
| 1.2.2 一氧化氮在脑缺血/再灌注过程中的作用 |
| 1.2.3 一氧化氮的检测方法 |
| 1.3 脑缺血的治疗方法 |
| 1.3.1 一般保护措施 |
| 1.3.2 神经保护药物 |
| 1.3.3 脑缺血/再灌注预处理的研究(ischemic pre-conditioning) |
| 1.3.4 脑缺血/再灌注后处理的研究(ischemic post-conditioning) |
| 1.4 本课题的研究目的、意义及内容 |
| 1.4.1 研究目的及意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第2章 全脑缺血及再灌注过程中大鼠海马区内一氧化氮的在体检测 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 NO电极选择性与敏感性的检测 |
| 2.2.1 材料和方法 |
| 2.2.2 实验结果 |
| 2.3 全脑缺血及再灌注模型中NO的检测 |
| 2.3.1 材料和方法 |
| 2.3.2 实验结果 |
| 2.4 分析和讨论 |
| 第3章 缺血/再灌注过程中海马神经元内一氧化氮的检测 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 分析和讨论 |
| 第4章 缺血后处理过程中大鼠海马内一氧化氮的变化研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 脑缺血后处理过程中NO的检测 |
| 4.2.1 材料和方法 |
| 4.2.2 实验结果 |
| 4.3 不同缺血后处理方法对全脑缺血/再灌注损伤的作用 |
| 4.3.1 材料和方法 |
| 4.3.2 实验结果 |
| 4.4 分析和讨论 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 研究工作总结 |
| 5.2 进一步工作展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 |
（7）西酞普兰对全脑缺血VD大鼠神经发生的影响及5-HT1A受体机制初探（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 西酞普兰对全脑缺血VD 大鼠神经发生的影响及5-HT1A受体机制初探 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 实验性脑缺血后神经发生研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表的论文和参编的着作 |
| 英文论着 |
（8）急性脑缺血再灌注皮层单胺类神经递质动态变化及中药干预作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 急性脑缺血再灌注中单胺类神经递质的研究进展 |
| 综述二 中医治疗中风病急性期治则治法概述 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 急性脑缺血再灌注不同时间皮层单胺类神经递质的动态变化 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 心脑舒通胶囊对急性脑缺血再灌注皮层单胺类神经递质的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）电项针对脑缺血再灌注大鼠脑保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、祖国医学对脑梗塞的认识 |
| 二、现代医学对脑梗塞的认识 |
| 三、针刺对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究进展 |
| 实验研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文 |
| 个人简历 |
（10）三七总皂苷合黄芪总皂苷对实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词 |
| 综述一 炎症和自由基在脑缺血再灌注损伤中的作用 |
| 综述二 NF-κB的信号转导途径及在脑缺血再灌注损伤中的作用 |
| 综述三 黄芪总皂苷、三七总皂苷的化学成分及对脑缺血自由基和炎症反应的影响 |
| 前言 |
| 第一部分 三七总皂苷和黄芪总皂苷的制备 |
| 第一单元 三七总皂苷的制备 |
| 材料 |
| 方法与结果 |
| 第二单元 黄芪总皂苷的制备 |
| 材料 |
| 方法与结果 |
| 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 三七总皂苷合黄芪总皂苷优化剂量的选择 |
| 第一单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的优化剂量筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷抑制小鼠双侧颈总动脉结扎脑缺血再灌注损伤的优化剂量筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 第一单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对MCAO大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型大鼠脑水肿及脑血管通透性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制研究 |
| 第一单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型小鼠抗氧化作用的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中性粒细胞浸润及相关因子的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第三单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织COX-2活性、PGE_2含量影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第四单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中细胞因子的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第五单元 三七总皂苷合黄芪总皂苷对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织NF-κB、I-κBα、P-I-κBα的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、沙土鼠全脑缺血再灌流时不同脑区聚胺代谢变化的动态观察（论文参考文献）
- [1]ERK通路介导的高尔基体应激在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制[D]. 朱蓓蕾. 苏州大学, 2018(04)
- [2]丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究[D]. 王泽锋. 浙江中医药大学, 2014(05)
- [3]黄蒲通窍胶囊对全脑缺血再灌注大鼠认知行为及神经再生的影响[D]. 储丹晨. 安徽中医药大学, 2014(12)
- [4]H2S对大鼠缺血性神经损伤的保护作用及机制研究[D]. 李战永. 南开大学, 2012(07)
- [5]亚低温后适应对树鼩局灶性脑缺血VEGF表达及神经元抗凋亡机制的研究[D]. 李飞. 昆明医学院, 2010(08)
- [6]脑缺血及再灌注过程中大鼠海马区一氧化氮动态变化的在体研究[D]. 刘珂舟. 浙江大学, 2009(07)
- [7]西酞普兰对全脑缺血VD大鼠神经发生的影响及5-HT1A受体机制初探[D]. 黄河清. 第三军医大学, 2008(03)
- [8]急性脑缺血再灌注皮层单胺类神经递质动态变化及中药干预作用[D]. 陶冶. 北京中医药大学, 2008(01)
- [9]电项针对脑缺血再灌注大鼠脑保护作用的实验研究[D]. 朱肖菊. 黑龙江中医药大学, 2008(12)
- [10]三七总皂苷合黄芪总皂苷对实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D]. 任周新. 北京中医药大学, 2008(12)